目的 檢測聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)/ 柞蠶絲素蛋白(wild antheraea pernyi silk fibroin,WSF)電紡膜與肌腱細胞的細胞相容性,探討其作為肌腱組織工程支架材料的可行性。 方法 以質量分數為98% 的甲酸為溶劑,配制濃度均為11% 的WSF 溶液、PVA 溶液及PVA/WSF(質量配比為9 ∶ 1)溶液,采用電紡絲技術制備WSF、PVA及PVA/WSF 電紡膜,掃描電鏡觀察電紡成絲情況。取5 只3 日齡SD 大鼠尾腱,體外分離培養肌腱細胞并傳至第3 代進行實驗。取濃度為1 × 106 個/ mL 肌腱細胞分別與PVA 及PVA/WSF 電紡膜復合培養,4、12 h 采用MTT 法測量細胞黏
附率。取濃度為4.5 × 103 個/mL 肌腱細胞,分別于PVA、1/2 PVA、1/4 PVA、PVA/WSF、1/2 PVA/WSF、1/4 PVA/WSF 電紡膜浸提液中培養,MTT 法測定培養1、3、5、7 d 的吸光度(A)值,并進行毒性等級評價。取PVA、PVA/WSF 電紡膜分別與細胞密度為1 × 106 個/ mL 的肌腱細胞懸液100 μL 復合培養制備細胞- 材料復合物,7 d 后行HE 染色觀察,1、3、5、7 d行掃描電鏡觀察。 結果 WSF 甲酸溶液無法電紡成絲,PVA 和PVA/WSF 甲醛溶液均可成功電紡成絲。肌腱細胞與PVA、PVA/WSF 電紡膜復合培養4 h 后,其細胞黏附率分別為26.9% ± 0.4%、87.0% ± 1.0%,差異有統計學意義(t=100.400,P=0.000);復合培養12 h 后,其細胞黏附率分別為35.2% ± 0.6%、110.0% ± 1.7%,差異有統計學意義(t=42.500,P=0.000)。體外浸提液毒性評價結果顯示,培養后1、3、5、7 d 各種電紡膜間細胞A 值比較,差異均有統計學意義(P lt; 0.05);1/2 PVA和1/4 PVA 浸提液細胞毒性等級差異有統計學意義(P lt; 0.05)。細胞- 材料復合物的組織學及掃描電鏡觀察顯示肌腱細胞均可黏附于PVA、PVA/WSF 電紡膜表面,但PVA/WSF 電紡膜上細胞較多。 結 論 PVA/WSF 電紡膜支架材料具有良好的細胞相容性,有望成為肌腱組織工程的理想支架。
引用本文: 吳琳琳,李敏,趙晉,陳登龍,周志華. 聚乙烯醇/ 柞蠶絲素蛋白材料作為肌腱組織工程支架材料的初步研究. 中國修復重建外科雜志, 2011, 25(2): 181-186. doi: 復制