【摘 要】 目的 探討傳統中藥紅景天苷誘導大鼠BMSCs 向膽堿能神經細胞分化的作用及影響，以期為紅景
天苷應用于干細胞治療神經系統疾病提供理論依據。 方法 取4 ～ 6 周齡Wistar 大鼠（體重約120 g）2 只分離、培養
BMSCs，并采用流式細胞儀鑒定。取第2 代細胞，根據誘導方法不同將實驗分為紅景天苷誘導組（A 組）、維甲酸誘導組
（B 組）和空白對照組（C 組），A、B 組BMSCs 分別采用紅景天苷（20 μg/mL）和維甲酸（5 μmol/mL）誘導培養1、3、6、9 d，MTT 法檢測細胞增殖活力；細胞免疫熒光染色檢測神經細胞相關標志分子神經元特異性烯醇化酶（neuron-specific
enolase，NSE）、神經微管相關蛋白2（microtubule-associated protein 2，MAP2）、β- 微管蛋白Ⅲ（β-Tubulin Ⅲ）、神經膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、乙酰膽堿（Acetylcholine, Ach）及NGF 的表達；RT-PCR 檢測NSE、β-Tubulin Ⅲ、GFAP、γ- 氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）、 腦源性神經生長因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF） mRNA 的表達；ELISA 法測定培養液中BDNF 和NGF 含量；Western blot 檢測NGF 蛋白表達水平。 結果 流式細胞儀檢測顯示，CD90 和CD106 陽性，CD34 和CD45 陰性，實驗細胞為BMSCs。A、B 組誘導培養6 d 和9 d，細胞增殖活力較C 組明顯增強（P lt; 0.05）。RT-PCR 檢測示，A 組誘導培養6 d，NSE、BDNF、β-Tubulin Ⅲ、GFAP mRNA 表達豐度上調至峰值。B 組誘導培養6 d，NSE mRNA 表達豐度上調至峰值；1 d 時BDNF mRNA 表達豐度上調，6 d 時達峰值；3 d 時β-Tubulin Ⅲ mRNA 表達豐度上調至峰值；1 d 時 GFAP mRNA 表達豐度達峰值，與其余各時間點及C 組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.01）。各組各時間點均未見GABA mRNA 表達。細胞免疫熒光染色示，誘導培養3 d，A、B 組NSE、MAP2、β-Tubulin Ⅲ和GFAP 陽性率與C 組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.01）；A、B 組誘導培養 3、6、9 d，Ach 陽性率均高于誘導培養1 d 時及C 組陽性率（P lt; 0.01）；A、B 組各時間點NGF 陽性率均顯著高于C 組（P lt; 0.01）。ELISA 法檢測顯示，A、B 組誘導培養 1、3、6、9 d 時，BDNF、NGF 表達水平均較C 組上調（P lt; 0.01），各時間點A、B 組間BDNF 表達水平比較差異無統計學意義（P lt; 0.01）。Western blot 檢測顯示，A 組誘導培養6 d、B 組誘導培養3 d 時 NGF 蛋白表達最高。 結論 紅景天苷能定向誘導大鼠BMSCs 分化為膽堿能神經細胞。
引用本文： 張明,趙紅斌,荔志云,楊銀書,文益民,董菊子,張全偉,葛寶豐. 紅景天苷對大鼠BMSCs 向膽堿能神經細胞分化的影響. 中國修復重建外科雜志, 2012, 26(2): 158-165. doi: 復制