目的構建抑制大鼠心肌細胞kir2．1基因的真核表達質粒pEGFP6-kir2．1，觀察對大鼠心肌細胞kir2．1信使RNA（mRNA）、蛋白表達情況及搏動頻率的影響。方法選擇5個針對大鼠心肌細胞kir2．1基因的RNA干擾（RNA interference）位點，設計合成5對相應的寡核苷酸鏈，形成雙鏈后依次將其連人帶有U6啟動子的載體，得到含5個目的基因的重組質粒pEGFP6-kir2．1。轉染大鼠心肌細胞，并將其分為3組：實驗組、陰性質粒對照組和空白對照組。轉染后72h，用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT—PCR）和蛋白印跡法（Western—blotting）檢測kir2．1mRNA和蛋白表達情況，并觀察細胞搏動頻率。結果轉染后72h，實驗組心肌細胞kir2．1mRNA和蛋白表達明顯低于兩對照組（P〈0．01），兩對照組間比較差別無統計學意義；實驗組搏動頻率增加，并顯著高于兩對照組（P〈0．01），兩對照組之間搏動頻率差別無統計學意義。結論真核表達質粒pEGFP6-kir2．1能明顯抑制大鼠kir2．1基因的表達，提高大鼠心肌細胞的自律性。

引用本文： 李凡東,雷印勝,鄒承偉,等. 質粒介導shRNA對心肌細胞kir2．1蛋白表達和搏動頻率的影響. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2006, 13(1): 28-31. doi: 復制