• (華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院 心外科, 武漢 430022);
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目的 采用Amplex red熒光法檢測組織工程心臟瓣膜(tissue engineered heart valve,TEHV)中賴氨酰氧化酶(lysyl oxidase, LOX)的活性。 方法 經胰蛋白酶+乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚和核酸酶處理,去除豬主動脈瓣葉的細胞成分,然后在其表面種植大鼠肌成纖維細胞,構建TEHV。用高糖培養基在體外培養瓣膜27 d,再用不含酚酞和血清的培養基培養24h, 收集此時的培養基作為樣本,用Amplex red熒光法檢測樣本中LOX的濃度,同時應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測TEHV中LOXmRNA的表達。 結果 樣本中LOX的熒光值為45.60±1.66,根據標準曲線獲得相應的LOX濃度為0.123±0.003μg/ml,同時各個TEHV均有LOXmRNA的表達,與Amplex red熒光法檢測的結果相一致。 結論 應用Amplex red熒光法檢測TEHV中LOX的活性具有可行性,并為反映LOX對TEHV細胞外基質中膠原交聯的重要作用提供了方法依據。

引用本文: 洪昊,董念國,史嘉瑋. Amplex Red熒光法檢測組織工程瓣膜賴氨酰氧化酶活性. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2007, 14(1): 27-30. doi: 復制