目的 通過研究鋅指Krüppel 樣轉錄因子2( Klf2) 及紅系衍生核因子相關因子2 ( Nrf2) /BTB-CNC 異體同源體1( Bach1) 在經香煙煙霧提取物( CSE) 刺激的大鼠氣道上皮細胞中的表達, 了解其感受氧化應激對靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 的調控作用。
方法 采用酶消化法提取大鼠原代氣管-支氣管上皮細胞, 并用10% CSE 干預細胞6 h, 收集細胞, 雙酶法檢測γ-GCS 活性; 通過免疫細胞化學法觀察Nrf2 /Bach1 的核轉位; 采用Western blot 和RT-PCR 技術研究細胞中 Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS 的蛋白及mRNA 表達。
結果 大鼠氣管-支氣管上皮細胞經CSE 誘導后其 γ-GCS活性明顯增高。免疫細胞化學結果顯示Nrf2 經CSE 刺激后出現由核外向核內的轉位, Bach1 經CSE 刺激后出現由核內向核外的轉位。Western blot 結果顯示CSE 處理組中Klf2、Nrf2、Bach1、 γ-GCS蛋白水平較對照組顯著升高( P lt;0.05) ; RT-PCR 結果顯示CSE 處理組中Klf2、Nrf2、Bach1、 γ-GCS mRNA 水平較對照組顯著升高( P lt;0.05) 。直線相關分析表明γ-GCS 蛋白表達與Klf2、Nrf2、 Bach1 呈正相關( P lt;0.05) 。
結論 CSE 可能通過轉錄因子Klf2、Nrf2、Bach1 調節γ-GCS 的表達。
引用本文： 黃暢宇,戴愛國. 轉錄因子Klf2 和Nrf2 /Bach1 調控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在氣道上皮細胞中的作用. 中國呼吸與危重監護雜志, 2012, 11(1): 23-27. doi: 復制