白細胞介素-10腺病毒載體制備及其在血管平滑肌細胞的表達_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

汪圣毅 ¹ , 王玉琦 ² , 符偉國 ² , 劉康達 ³ , 劉弋 ¹

1.安徽醫科大學第一附屬醫院普外科(合肥230022);;
2.復旦大學中山醫院血管外科(上海200032);;
3.復旦大學中山醫院實驗中心(上海200032);

關鍵詞：

腺病毒載體白細胞介素血管內膜增生

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目的　構建人白細胞介素(human interleukin, hIL)-10和綠色熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)雙表達腺病毒載體，觀察目的基因在血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的表達。
方法　以T載體(pUCm-T/hIL-10 cDNA)為模板，PCR擴增hIL-10 cDNA，連入穿梭質粒，〖JP2〗卡那霉素抗性篩選，Not Ⅰ、Xhol Ⅰ酶切鑒定，測序，局部序列搜索工具(BLAST)分析序列正確，Pme Ⅰ 酶切，電穿孔單獨轉化BJ5183-AD-1，轉化XL10-Gold擴增，PacⅠ酶切，AD-293細胞包裝，PCR鑒定，測定病毒滴度，脂質體介導轉染VSMCs，熒光顯微鏡下觀察GFP的表達，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測培養上清液中hIL-10的含量。
結果　重組穿梭質粒構建正確，同源重組后PacⅠ酶切獲得30 kb和3 kb片段，重組病毒滴度為3×1010 efu/ml，PCR檢測含目的基因，轉染的VSMCs可見綠色熒光，hIL-10含量為25 ng/106個細胞。
結論　構建的雙表達載體于VSMCs成功表達，為血管內膜增生的基因治療打下基礎。

引用本文： 汪圣毅,王玉琦,符偉國,劉康達,劉弋. 白細胞介素-10腺病毒載體制備及其在血管平滑肌細胞的表達. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007, 14(6): 660-664. doi: 復制

1.	Xing Z, Ohkawara Y, Jordana M, et al. Adenoviral vector-mediated interleukin-10 expression in vivo: intramuscular gene transfer inhibits cytokine responses in endotoxemia [J]. Gene Ther, 1997; 4(2)∶140.
2.	陳紫千，湯耀卿．白細胞介素10基因治療急性胰腺炎的研究現狀 [J]. 國外醫學·外科學分冊， 2004； 31(2)∶75.
3.	汪圣毅，王玉琦，符偉國，等. 從體外培養的外周血單個核細胞克隆人白細胞介素-10 cDNA [J]. 中華實驗外科雜志， 2005； 22(6)∶659.
4.	薩姆布魯克， D.W.拉塞爾著. 黃培堂，王嘉璽，朱厚礎譯. 分子克隆實驗指南 [M]. 第3版．北京：科學出版社， 2002∶91～97.
5.	江千里，王健民，江汕，等. 經典方法與LaSRT法測定綠色熒光蛋白標記重組病毒滴度的研究 [J]. 第一軍醫大學學報， 2003； 23（10）∶1101.
6.	汪圣毅，王玉琦，符偉國，等. 人臍帶動脈平滑肌細胞的培養及純化 [J]. 安徽醫科大學學報， 2007； 42(2)∶231.
7.	Mitra AK, Gangahar DM, Agrawal DK. Cellular, molecular and immunological mechanisms in the pathophysiology of vein graft intimal hyperplasia [J]. Immunol Cell Biol, 2006; 84(2)∶115.
8.	Koppensteiner R, Spring S, Amann-Vesti BR, et al. Low-molecular-weight heparin for prevention of restenosis after femoropopliteal percutaneous transluminal angioplasty: a randomized controlled trial [J]. J Vasc Surg, 2006; 44(6)∶1247.
9.	Kibos A, Campeanu A, Tintoiu I. Pathophysiology of coronary artery in-stent restenosis [J]. Acute Card Care, 2007; 9(2)∶111.
10.	Katayama T, Ueba H, Tsuboi K, et al. Reduction of neointimal hyperplasia after coronary stenting by pioglitazone in nondiabetic patients with metabolic syndrome [J]. Am Heart J, 2007; 153(5)∶762.
11.	吳忠均, 李昱, 時德, 等. 聯合轉染tPA基因和PCNA反義寡核苷酸抑制兔自體移植動脈再狹窄研究 [J]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2005； 12(5)∶459.
12.	劉江濤, 張金山. 血管再狹窄的基因治療 [J]. 中國介入影像與治療學, 2006； 3(1)∶69.
13.	Zimmerman MA, Reznikov LL, Raeburn CD, et al. Interleukin-10 attenuates the response to vascular injury [J]. J Surg Res, 2004; 121(2)∶206.
14.	Mazighi M, Pelle A, Gonzalez W, et al. IL-10 inhibits vascular smooth muscle cell activation in vitro and in vivo [J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2004; 287(2)∶H866.
15.	陳吉泉，修清玉，劉濤，等. 小鼠T-bet基因重組腺病毒載體的構建及制備 [J]. 免疫學雜志， 2007； 23（1）∶84.
16.	余斌，蘇秀云，汪志中，等. 應用AdEasy腺病毒載體系統構建人骨形成蛋白2基因重組腺病毒 [J]. 中華實驗外科雜志， 2005； 22（5）∶538.
17.	尹冰楠，李冬田，李秋香. 一種簡易、廉價、高效構建重組腺病毒載體的方法 [J]. 天津醫科大學學報， 2005； 11（2）∶171.
18.	張梅，何金生，朱梅，等. 重組腺病毒方法的改建 [J]. 中國公共衛生， 2005； 21（1）∶2319　Lei P, Li WH, Liao WJ, et al. Construction and co-expression of bicistronic plasmid encoding human WEE1 and stem cell factor [J]. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai)， 2005; 37(2)∶107.
19.	Ngoi SM, Chien AC, Lee CG. Exploiting internal ribosome entry sites in gene therapy vector design [J]. Curr Gene Ther， 2004; 4(1)∶15.
20.	Wong ET, Ngoi SM, Lee CG. Improved co-expression of multiple genes in vectors containing internal ribosome entry sites (IRESes) from human genes [J]. Gene Ther， 2002; 9(5)∶337.

1. 　Xing Z, Ohkawara Y, Jordana M, et al. Adenoviral vector-mediated interleukin-10 expression in vivo: intramuscular gene transfer inhibits cytokine responses in endotoxemia [J]. Gene Ther, 1997; 4(2)∶140.
2. 　陳紫千，湯耀卿．白細胞介素10基因治療急性胰腺炎的研究現狀 [J]. 國外醫學·外科學分冊， 2004； 31(2)∶75.
3. 　汪圣毅，王玉琦，符偉國，等. 從體外培養的外周血單個核細胞克隆人白細胞介素-10 cDNA [J]. 中華實驗外科雜志， 2005； 22(6)∶659.
4. 　薩姆布魯克， D.W.拉塞爾著. 黃培堂，王嘉璽，朱厚礎譯. 分子克隆實驗指南 [M]. 第3版．北京：科學出版社， 2002∶91～97.
5. 　江千里，王健民，江汕，等. 經典方法與LaSRT法測定綠色熒光蛋白標記重組病毒滴度的研究 [J]. 第一軍醫大學學報， 2003； 23（10）∶1101.
6. 　汪圣毅，王玉琦，符偉國，等. 人臍帶動脈平滑肌細胞的培養及純化 [J]. 安徽醫科大學學報， 2007； 42(2)∶231.
7. 　Mitra AK, Gangahar DM, Agrawal DK. Cellular, molecular and immunological mechanisms in the pathophysiology of vein graft intimal hyperplasia [J]. Immunol Cell Biol, 2006; 84(2)∶115.
8. 　Koppensteiner R, Spring S, Amann-Vesti BR, et al. Low-molecular-weight heparin for prevention of restenosis after femoropopliteal percutaneous transluminal angioplasty: a randomized controlled trial [J]. J Vasc Surg, 2006; 44(6)∶1247.
9. 　Kibos A, Campeanu A, Tintoiu I. Pathophysiology of coronary artery in-stent restenosis [J]. Acute Card Care, 2007; 9(2)∶111.
10. 　Katayama T, Ueba H, Tsuboi K, et al. Reduction of neointimal hyperplasia after coronary stenting by pioglitazone in nondiabetic patients with metabolic syndrome [J]. Am Heart J, 2007; 153(5)∶762.
11. 　吳忠均, 李昱, 時德, 等. 聯合轉染tPA基因和PCNA反義寡核苷酸抑制兔自體移植動脈再狹窄研究 [J]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2005； 12(5)∶459.
12. 　劉江濤, 張金山. 血管再狹窄的基因治療 [J]. 中國介入影像與治療學, 2006； 3(1)∶69.
13. 　Zimmerman MA, Reznikov LL, Raeburn CD, et al. Interleukin-10 attenuates the response to vascular injury [J]. J Surg Res, 2004; 121(2)∶206.
14. 　Mazighi M, Pelle A, Gonzalez W, et al. IL-10 inhibits vascular smooth muscle cell activation in vitro and in vivo [J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2004; 287(2)∶H866.
15. 　陳吉泉，修清玉，劉濤，等. 小鼠T-bet基因重組腺病毒載體的構建及制備 [J]. 免疫學雜志， 2007； 23（1）∶84.
16. 　余斌，蘇秀云，汪志中，等. 應用AdEasy腺病毒載體系統構建人骨形成蛋白2基因重組腺病毒 [J]. 中華實驗外科雜志， 2005； 22（5）∶538.
17. 　尹冰楠，李冬田，李秋香. 一種簡易、廉價、高效構建重組腺病毒載體的方法 [J]. 天津醫科大學學報， 2005； 11（2）∶171.
18. 　張梅，何金生，朱梅，等. 重組腺病毒方法的改建 [J]. 中國公共衛生， 2005； 21（1）∶2319　Lei P, Li WH, Liao WJ, et al. Construction and co-expression of bicistronic plasmid encoding human WEE1 and stem cell factor [J]. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai)， 2005; 37(2)∶107.
19. 　Ngoi SM, Chien AC, Lee CG. Exploiting internal ribosome entry sites in gene therapy vector design [J]. Curr Gene Ther， 2004; 4(1)∶15.
20. 　Wong ET, Ngoi SM, Lee CG. Improved co-expression of multiple genes in vectors containing internal ribosome entry sites (IRESes) from human genes [J]. Gene Ther， 2002; 9(5)∶337.

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