人AWP1重組腺病毒的構建及其在人血管內皮細胞中的表達和定位_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

曹永寬 ¹ , 莫永炎 ² , 劉志峰 ² , 薛剛 ¹ , 王培紅 ¹ , 姜勇 ² , 田伏洲 ¹

1.成都軍區總醫院全軍普通外科中心(成都 610083);;
2.南方醫科大學病生教研室(廣州 510515);

關鍵詞：

AWP1 重組腺病毒 ECV304細胞載體構建細胞信號轉導

視頻：

導出 下載 收藏 掃碼 引用

摘要 全文 圖表 視頻 參考文獻 施引文獻 補充材料

目的構建人flag-AWP1（associated with protein kinase C related kinase 1）基因的重組腺病毒載體作為AWP1的轉基因工具，研究AWP1在人血管內皮細胞ECV304中的表達與定位。方法將flag-AWP1基因亞克隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV，經酶切鑒定正確后PmeⅠ線性化,轉化至帶有骨架質粒pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183中進行重組；經PacⅠ酶切鑒定和 PCR鑒定、線性化后，用Lipofectamine轉染293細胞進行包裝、反復感染以獲取高滴度重組病毒上清。再用獲得的重組腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304細胞，激光掃描共焦顯微鏡下觀察AWP1在ECV304細胞中的表達與定位。結果包裝病毒顆粒的PCR分析顯示，成功獲得了重組腺病毒Ad-flag-AWP1，該重組腺病毒能夠高效感染ECV304細胞，并在激光掃描共焦顯微鏡下觀察到AWP1在細胞內成功表達，且定位于細胞膜內側。結論成功構建了flag-AWP1的重組腺病毒基因轉染載體，AWP1在ECV304細胞中的表達與定位提示AWP1可能具有細胞信號轉導因子的潛能，尚需進一步研究。

引用本文： 曹永寬,莫永炎,劉志峰,薛剛,王培紅,姜勇,田伏洲. 人AWP1重組腺病毒的構建及其在人血管內皮細胞中的表達和定位. 中國普外基礎與臨床雜志, 2009, 16(12): 987-990. doi: 復制

1.	Duan W, Sun B, Li TW, et al. Cloning and characterization of AWP1, a novel protein that associates with serine/threonine kinase PRK1 in vivo [Ｊ]. Gene, 2000; 256(1-2): 113-121.
2.	Amano M, Mukai H, Ono Y, et al. Identification of a putative target for Rho as the serine-threonine kinase protein kinase N [Ｊ]. Science, 1996; 271(5249): 648-650.
3.	Watanabe G, Saito Y, Madaule P, et al. Protein kinase N (PKN) and PKN-related protein rhophilin as targets of small GTPase Rho [Ｊ]. Science, 1996; 271(5249): 645-648.
4.	Klug A, Schwabe JW. Protein motifs 5. Zinc fingers [Ｊ]. FASEB J, 1995; 9(8): 597-604.
5.	He KL, Ting AT. A20 inhibits tumor necrosis factor (TNF) alpha-induced apoptosis by disrupting recruitment of TRADD and RIP to the TNF receptor 1 complex in Jurkat T cells [Ｊ]. Mol Cell Biol, 2002; 22(17): 6034-6045.
6.	徐明清, 嚴律南, 茍興華, 等. 鋅指蛋白A20促進同種異體大鼠小體積移植肝再生并抑制急性排斥 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2008； 15(8): 572-578.
7.	莫永炎, 曹永寬, 劉亞偉, 等. 人His-AWP1融合蛋白表達載體的構建及其在原核生物的表達 [Ｊ]. 中華神經醫學雜志， 2003; 2(2): 123-125.
8.	He TC, Zhou S, da Costa LT, et al. A simplified system for generating recombinant adenoviruses [Ｊ]. Proc Natl Acad Sci USA, 1998; 95(5): 2509-2514.
9.	夏冬, 徐亮, 萬禮儀, 等. 重組腺病毒介導hTIMP-1對人肝癌細胞系體外增殖的影響 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007； 14(4): 409-412.
10.	曹永寬, 莫永炎, 田伏洲, 等. 人AWP1-RFP融合基因重組腺病毒的快速構建及其鑒定 [Ｊ]. 中華神經醫學雜志， 2005; 4(5): 434-438.
11.	汪勝毅, 王玉琦, 符偉國, 等. 白細胞介素-10腺病毒載體制備及其在血管平滑肌細胞的表達 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007; 14(6): 660-664.
12.	陳方, 薛新波, 王從俊, 等. 腺病毒介導mda-7基因聯合阿霉素治療裸鼠移植肝癌的作用 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2008； 16(9): 673-677.
13.	曹永寬, 莫永炎, 田伏洲, 等. 人GFP-AWP1融合基因載體的構建及其在293細胞中的表達 [Ｊ]. 第一軍醫大學學報, 2005; 25（2）: 174-176.

1. Duan W, Sun B, Li TW, et al. Cloning and characterization of AWP1, a novel protein that associates with serine/threonine kinase PRK1 in vivo [Ｊ]. Gene, 2000; 256(1-2): 113-121.
2. Amano M, Mukai H, Ono Y, et al. Identification of a putative target for Rho as the serine-threonine kinase protein kinase N [Ｊ]. Science, 1996; 271(5249): 648-650.
3. Watanabe G, Saito Y, Madaule P, et al. Protein kinase N (PKN) and PKN-related protein rhophilin as targets of small GTPase Rho [Ｊ]. Science, 1996; 271(5249): 645-648.
4. Klug A, Schwabe JW. Protein motifs 5. Zinc fingers [Ｊ]. FASEB J, 1995; 9(8): 597-604.
5. He KL, Ting AT. A20 inhibits tumor necrosis factor (TNF) alpha-induced apoptosis by disrupting recruitment of TRADD and RIP to the TNF receptor 1 complex in Jurkat T cells [Ｊ]. Mol Cell Biol, 2002; 22(17): 6034-6045.
6. 徐明清, 嚴律南, 茍興華, 等. 鋅指蛋白A20促進同種異體大鼠小體積移植肝再生并抑制急性排斥 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2008； 15(8): 572-578.
7. 莫永炎, 曹永寬, 劉亞偉, 等. 人His-AWP1融合蛋白表達載體的構建及其在原核生物的表達 [Ｊ]. 中華神經醫學雜志， 2003; 2(2): 123-125.
8. He TC, Zhou S, da Costa LT, et al. A simplified system for generating recombinant adenoviruses [Ｊ]. Proc Natl Acad Sci USA, 1998; 95(5): 2509-2514.
9. 夏冬, 徐亮, 萬禮儀, 等. 重組腺病毒介導hTIMP-1對人肝癌細胞系體外增殖的影響 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007； 14(4): 409-412.
10. 曹永寬, 莫永炎, 田伏洲, 等. 人AWP1-RFP融合基因重組腺病毒的快速構建及其鑒定 [Ｊ]. 中華神經醫學雜志， 2005; 4(5): 434-438.
11. 汪勝毅, 王玉琦, 符偉國, 等. 白細胞介素-10腺病毒載體制備及其在血管平滑肌細胞的表達 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007; 14(6): 660-664.
12. 陳方, 薛新波, 王從俊, 等. 腺病毒介導mda-7基因聯合阿霉素治療裸鼠移植肝癌的作用 [Ｊ]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2008； 16(9): 673-677.
13. 曹永寬, 莫永炎, 田伏洲, 等. 人GFP-AWP1融合基因載體的構建及其在293細胞中的表達 [Ｊ]. 第一軍醫大學學報, 2005; 25（2）: 174-176.

《中國普外基礎與臨床雜志》

人AWP1重組腺病毒的構建及其在人血管內皮細胞中的表達和定位

摘要 全文 圖表 視頻 參考文獻 施引文獻 補充材料

Format

Content

《中國普外基礎與臨床雜志》

人AWP1重組腺病毒的構建及其在人血管內皮細胞中的表達和定位

摘要 全文 圖表 視頻 參考文獻 施引文獻 補充材料

Format

Content

摘要全文圖表視頻參考文獻施引文獻補充材料