引用本文： 劉暢, 馬利軍. 血清可溶 CD146 在判定肺腺癌 EGFR-TKI 獲得性耐藥中的作用. 中國呼吸與危重監護雜志, 2018, 17(2): 155-160. doi: 10.7507/1671-6205.201709021 復制
肺癌是全球死亡率最高的腫瘤，其中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）約占肺癌的 85% 以上，而肺腺癌已超越鱗癌居肺癌首位[1-2]。大多數肺癌患者在確診時已屬晚期，然而晚期肺癌的一線化療方案中位無進展生存期僅有 5 個月左右，患者預后較差[3]。近年來，分子靶向藥物在晚期肺癌的治療中取得了滿意的療效，為肺癌患者帶來了新的希望，表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）敏感突變的患者采用酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）治療的有效率達 50%～80%[4-5]。可是隨著治療時間的延長，幾乎所有的患者都不可避免地出現耐藥，降低了患者的預后。因此，能夠及時發現耐藥并給予二代藥物對患者的預后影響重大。而目前臨床上判斷耐藥的方法仍然是定期的 CT 監測，缺乏血清學監測指標，這不僅給患者帶來了大量的輻射，還具有滯后性。本研究采用 ELISA 方法檢測患者在不同服藥時間段血清可溶性 CD146（soluble CD146，sCD146） 的變化，探討其判斷表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）敏感突變患者使用 TKI 的藥效和耐藥的診斷價值。
1 資料與方法
1.1 臨床資料和分組
納入 2016 年 1 月至 2016 年 12 月于鄭州大學人民醫院經組織病理學和分子病理學檢查證實的肺腺癌 EGFR 敏感突變患者 144 例，男 41 例，女 103 例；年齡（60±11）歲。根據服用 TKI 時間段的不同將其分為未服藥組（31 例），服藥治療 1～3 個月組（25 例），服藥治療 4～6 個月組（19 例），服藥治療 7～12 個月組（25 例），服藥治療耐藥組（24 例），服藥治療超過 1 年未耐藥組（20 例）。根據國際肺癌研究學會在 2009 年公布的第 7 版 TNM 分期法，T1 期 37 例，T2 期 32 例，T3 期 16 例，T4 期 59 例。耐藥定義為 EGFR 敏感突變患者服藥后取得完全緩解或部分緩解，或是穩定在 ６ 個月以上出現進展。本研究獲得受檢對象的知情同意。
排除標準：（1）除肺癌的其他惡性腫瘤、結核及消耗性疾病；（2）入選前 1 個月發生急性感染或創傷；（3）急慢性腎臟疾病；（4）結締組織疾病、急性肝炎或慢性肝炎活動期；（5）入選前 1 個月發生過心血管事件或腦卒中；（6）糖尿病。
1.2 方法
1.2.1 一般檢查
入選病例均詳細詢問病史、既往史及用藥史等。
1.2.2 標本的采集
所有患者血液標本的采集均隔夜空腹 10 h 以上，無菌操作下靜脈取血 4～5 ml，在室溫放置 2 h 后于 2 200 g 離心 20 min 分離血清，用 EP 管分裝保存放置于–80 ℃ 冰箱至同一批次檢測。
1.2.3 試劑
Human CD146/MCAM ELISA 檢測試劑盒來源于北京義翹神州科技有限公司，產品貨號 KIT10115-1；湖州數康生物科技有限公司的多腫瘤標志物檢測試劑盒；酶標儀使用的是北京普朗酶標儀 9602。
1.2.4 血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）和神經元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）的檢測及方法
使用湖州數康生物科技有限公司的多腫瘤標志物檢測試劑盒，采用化學發光法檢測血清 CEA、NSE 水平。
1.2.5 血清 sCD146 標本的檢測及方法
用 1×洗滌緩沖液（300 μl/孔）洗板 3 次，拍干酶標板；加入標準品和待測樣本，100 μl/孔，15 min 內完成點樣，室溫孵育 2 h；棄去孔中液體，加入 1×洗滌緩沖液（300 μl/孔）洗板 3 次，拍干酶標板；將預先配制至工作濃度的檢測抗體加入酶標板中，100 μl/孔，混勻，室溫孵育 1 h；棄去孔中液體，加入 1×洗滌緩沖液（300 μl/孔）洗板 3 次，拍干酶標板；將預先配制的底物液加入酶標板中，200 μl/孔，混勻，室溫避光孵育 20 min；加入 50 μl/孔終止液至酶標板中，輕輕震動酶標板至顯色均勻。顏色的深淺跟 sCD146 的濃度呈正相關。用酶標儀在 450 nm 波長下測定吸光度值，計算樣品濃度。
參考近 10 年的文獻，正常人血清 sCD146 的參考范圍在 0～350 ng/ml。144 例服用 TKI 藥物的肺腺癌患者血清 sCD146 均超出正常范圍。為判斷不同性別、年齡、腫瘤分期、有無遠處轉移、腫瘤直徑、病灶數量之間血清 sCD146 有無差異，以sCD146 均值為界判斷其相關性。
1.3 統計學方法
統計分析采用 SPSS 21.0 軟件。計量資料以均數±標準差（
±s）表示。不同組別之間計量資料的差異用 Tamhane 法進行均數的兩兩比較，分類資料用 χ2 檢驗；組間年齡的差異用方差分析，性別差異用 χ2 檢驗；血清 sCD146 與 CEA、NSE 的關系用 Spearman 相關分析，sCD146 與腫瘤臨床相關指標的關系用 χ2 檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 一般臨床資料
六組患者間的年齡、性別差異無統計學意義。結果見表 1。
2.2 血清 sCD146 均值的比較
由表 1 和圖 1 結果可見，未服藥組血清 sCD146 水平最低，與其他所有組差異有統計學意義（P<0.05）；服藥治療 1～3 個月組血清 sCD146 水平最高（即服藥初期水平最高），隨著服藥時間的延長且在未耐藥前血清 sCD146 水平有下降趨勢但差異無統計學意義（P>0.05）；耐藥組血清 sCD146 水平較所有服藥未耐藥組水平有明顯下降趨勢（P<0.05），但仍顯著高于未服藥組（P<0.05）；服藥治療超過 1 年未耐藥組血清 sCD146 水平與所有服藥治療在 1 年內未耐藥組水平相當（P>0.05）。
2.3 血清 CEA、NSE 均值的比較以及與血清 sCD146 的關系
六組間的血清 CEA 水平差異無統計學意義（P>0.05）。血清 NSE 水平在服藥治療 4～6 個月組與服藥治療 7～12 個月組間差異有統計學意義（P<0.05），但測量值均在正常參考范圍內，其余組間差異無統計學意義（P>0.05）。結果見表 1。血清 sCD146 與血清 CEA、NSE 無相關性（P>0.05），結果見表 2。
2.4 血清 sCD146 與腫瘤臨床相關指標的關系
144 例服用 TKI 藥物的肺腺癌患者血清 sCD146 與性別、年齡、腫瘤分期、腫瘤直徑、病灶數量無相關性（P>0.05），與有無遠處轉移有相關性（P<0.05）。結果見表 3。54 例無遠處轉移肺腺癌患者高于 sCD146 均值的比例為 61.1%，90 例伴有遠處轉移的患者高于 sCD146 均值的比例為 41.1%，伴有遠處轉移的患者高于平均血清 sCD146 濃度比例要低于不伴有遠處轉移的患者。
表1
患者血清 sCD146、CEA、NSE 水平以及腫瘤臨床相關指標（
/例）
圖1
患者血清 sCD146 濃度分布
表2
血清 sCD146 與血清 CEA、NSE 的相關系數
表3
血清 sCD146 與腫瘤臨床相關指標的關系
3 討論
EGFR 是細胞膜表面的糖蛋白受體，屬于 ErbB 受體家族，具有酪氨酸激酶活性，當與配體-EGF 結合，可使酪氨酸殘基磷酸化，激活 EGFR，促進腫瘤細胞的生長、增殖。EGFR 表達于正常上皮細胞表面，在腫瘤細胞中常過表達，EGFR 的過表達和腫瘤細胞的轉移、浸潤、預后差有關。采用 EGFR-TKI治療 EGFR 敏感突變患者療效顯著，但是無論近期效果如何，幾乎所有的患者都不可避免地出現耐藥絕大多數在 1 年內。EGFR-TKI 獲得性耐藥的機制主要包括 T790M 突變[6-7]、MET 擴增[8-9]、KRAS 突變[10]和上皮間質轉化（epithelial–mesenchymal transition，EMT）等[11]。其中 EMT 是獲得性耐藥的重要機制之一，它表現為具有極性結構的上皮細胞喪失了緊密連接的結構的過程，在該過程中，上皮細胞轉變成間質細胞形態特征，獲得了間質細胞的分子標志物，且具有了更強的侵襲和遷移能力，同時伴隨著多條信號通路的激活[12]。研究表明，CD146 作為細胞的黏連分子，是 EMT 的間質分子標志物之一，參與 EMT 的過程[13]。Ye 等[14]發現，CD146 作為 Wnt5a 的受體，通過激活非經典 Wnt 通路促進腫瘤細胞遷移。國內外的多項研究證實，EGFR 敏感細胞株經 TKI 藥物誘導耐藥后，腫瘤細胞 CD146 表達上調[13, 15-16]。我們的前期研究也證實，肺腺癌敏感突變患者耐藥后，組織病理學結果提示 CD146 表達上調[17]。由此可見 CD146 參與 EGFR-TKI 耐藥過程，但通過何種分子機制參與仍不明確。
CD146 是一種單鏈膜貫通性糖蛋白，屬免疫球蛋白超家族成員，與許多細胞黏附分子（cell adhesion molecule，CAM）有同源性[18]，參與細胞與細胞以及細胞與細胞外基質間的黏附作用，促進腫瘤生長、血行轉移，與腫瘤侵襲和轉移密切相關，可作為腫瘤侵襲與轉移的相關標志物[19-22]。細胞膜上表達的 CD146 是內皮細胞先在胞內合成 CD146 的前體（相對分子質量約 100 000），隨后在細胞膜上表達成熟的 CD146（相對分子質量約 120 000），有研究者在細胞的上清液中發現了sCD146（相對分子質量約 110 000）。它與免疫球蛋白超家族的其他可溶性分子一樣，可能對調節和控制功能很重要。研究發現惡性腫瘤患者的外周血中 sCD146 異常增高，本研究結果也顯示肺腺癌患者血清 sCD146 濃度顯著高于正常人。
大多數服用 TKI 類藥物的患者會在 1 年左右耐藥，而臨床上尚缺乏有效的監測 TKI 耐藥的血清分子標志物，因此本研究觀察肺腺癌 EGFR 敏感突變患者血清 sCD146 在不同服藥時間段的血清濃度，判斷其診斷 TKI 耐藥的價值。結果顯示未服藥組的血清 sCD146 水平最低（P<0.05），服藥初期水平最高（P<0.05），隨著服藥時間的延長血清 sCD146 水平有下降趨勢（P>0.05）；耐藥后血清 sCD146 水平有明顯下降趨勢，但仍高于未服藥組（P<0.05）。這一結果提示血清 sCD146 可能參與 TKI 類藥物耐藥的分子機制并有可能成為判斷肺腺癌 EGFR-TKI 耐藥的血清分子標志物，具有潛在的診斷價值。本研究還發現長期服用 TKI 藥物超過 1 年仍未耐藥的患者血清 sCD146 的水平與短期服用有效的患者水平相當，可見雖然血清 sCD146 水平隨著服藥時間的延長有下降趨勢，但治療有效的患者仍能夠維持較高的血清 sCD146 水平，顯示血清 sCD146 也可作為監測 TKI 類藥物藥效的血清標志物。
CEA 是相對分子質量為 22 000 的多糖蛋白復合物，屬于廣譜性腫瘤標志物，特異性不高，但在肺癌組織中有較高的表達，且水平呈動態變化，可反映患者的病情進展、病灶轉移、療效檢測及預后判定。研究表明其動態變化水平可能與 NSCLC 患者病情發展呈正相關，隨臨床分期的增加而呈增加趨勢[23]。NSE 是神經母細胞瘤的特異性標志物，小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）患者血清 NSE 明顯增高，研究認為 NSE 是 SCLC 臨床診斷敏感性和特異性最強的腫瘤標志物，而接受靶向治療的肺腺癌患者有部分患者病理類型轉化為 SCLC[24-26]，但轉化機制尚不明確。因此，我們在檢測血清 sCD146 同時也檢測了血清 CEA、NSE 水平，同時分析 sCD146 與 CEA、NSE 的相關關系，判斷 CEA、NSE 能否成為判斷 TKI 類藥物耐藥的血清學指標。結果顯示，血清 NSE 水平絕大多數在參考范圍內，服藥治療 4～6 個月組與 7～12 個月組差異有統計學意義（P<0.05），但均值均在正常參考范圍內，其余組差異無統計學意義（P>0.05），考慮主要由血清 NSE 在肺腺癌患者中的敏感性、特異性均不高引起；絕大部分患者血清 CEA 水平高于正常值，但組間差異無統計學意義（P>0.05），可能與入選的患者大多數處于肺癌晚期有關。以上結果說明對于晚期服用 TKI 類藥物的患者，CEA、NSE 并不能成為判斷 TKI 類藥物耐藥的血清學指標。血清 sCD146 與有無遠處轉移相關，伴有遠處轉移的患者血清 sCD146 有下降趨勢，這與耐藥后血清 sCD146 的下降趨勢一致；血清 sCD146 與其他腫瘤臨床相關指標（性別、年齡、腫瘤分期、腫瘤直徑、病灶數量）無相關性（P>0.05），進一步分析發現該結果與大多數入選患者處于腫瘤晚期有關。若 TKI 類藥物能廣泛用于早期患者或者擴大樣本量增加早期患者入選數，結果可能會有所不同。
耐藥后的細胞組織學水平上 CD146 表達上調，而血清 sCD146 表達下降，猜測耐藥后的上皮細胞內使細胞膜上表達的成熟 CD146 脫落為 sCD146 的某種酶表達下降，從而導致耐藥后組織學和血清學的變化，但具體機制尚不明了，有待進一步深入研究。其次，因本研究既往無相關研究報道，采用的是類似橫斷面的研究方法，是在同一時間段檢測處于不同服藥時間的患者血清，如若采用隨訪的方法觀察同一批患者在不同服藥時間的血清差異，將更有說服力，也有待以后研究的進一步驗證。本研究結果雖然顯示血清 sCD146 水平有可能成為監測 TKI 藥效和判斷 TKI 耐藥的血清學指標，但距真正有臨床實用價值尚有一定距離。該結論還有待通過多中心、大樣本的臨床研究驗證。
肺癌是全球死亡率最高的腫瘤，其中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）約占肺癌的 85% 以上，而肺腺癌已超越鱗癌居肺癌首位[1-2]。大多數肺癌患者在確診時已屬晚期，然而晚期肺癌的一線化療方案中位無進展生存期僅有 5 個月左右，患者預后較差[3]。近年來，分子靶向藥物在晚期肺癌的治療中取得了滿意的療效，為肺癌患者帶來了新的希望，表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）敏感突變的患者采用酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）治療的有效率達 50%～80%[4-5]。可是隨著治療時間的延長，幾乎所有的患者都不可避免地出現耐藥，降低了患者的預后。因此，能夠及時發現耐藥并給予二代藥物對患者的預后影響重大。而目前臨床上判斷耐藥的方法仍然是定期的 CT 監測，缺乏血清學監測指標，這不僅給患者帶來了大量的輻射，還具有滯后性。本研究采用 ELISA 方法檢測患者在不同服藥時間段血清可溶性 CD146（soluble CD146，sCD146） 的變化，探討其判斷表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）敏感突變患者使用 TKI 的藥效和耐藥的診斷價值。
1 資料與方法
1.1 臨床資料和分組
納入 2016 年 1 月至 2016 年 12 月于鄭州大學人民醫院經組織病理學和分子病理學檢查證實的肺腺癌 EGFR 敏感突變患者 144 例，男 41 例，女 103 例；年齡（60±11）歲。根據服用 TKI 時間段的不同將其分為未服藥組（31 例），服藥治療 1～3 個月組（25 例），服藥治療 4～6 個月組（19 例），服藥治療 7～12 個月組（25 例），服藥治療耐藥組（24 例），服藥治療超過 1 年未耐藥組（20 例）。根據國際肺癌研究學會在 2009 年公布的第 7 版 TNM 分期法，T1 期 37 例，T2 期 32 例，T3 期 16 例，T4 期 59 例。耐藥定義為 EGFR 敏感突變患者服藥后取得完全緩解或部分緩解，或是穩定在 ６ 個月以上出現進展。本研究獲得受檢對象的知情同意。
排除標準：（1）除肺癌的其他惡性腫瘤、結核及消耗性疾病；（2）入選前 1 個月發生急性感染或創傷；（3）急慢性腎臟疾病；（4）結締組織疾病、急性肝炎或慢性肝炎活動期；（5）入選前 1 個月發生過心血管事件或腦卒中；（6）糖尿病。
1.2 方法
1.2.1 一般檢查
入選病例均詳細詢問病史、既往史及用藥史等。
1.2.2 標本的采集
所有患者血液標本的采集均隔夜空腹 10 h 以上，無菌操作下靜脈取血 4～5 ml，在室溫放置 2 h 后于 2 200 g 離心 20 min 分離血清，用 EP 管分裝保存放置于–80 ℃ 冰箱至同一批次檢測。
1.2.3 試劑
Human CD146/MCAM ELISA 檢測試劑盒來源于北京義翹神州科技有限公司，產品貨號 KIT10115-1；湖州數康生物科技有限公司的多腫瘤標志物檢測試劑盒；酶標儀使用的是北京普朗酶標儀 9602。
1.2.4 血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）和神經元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）的檢測及方法
使用湖州數康生物科技有限公司的多腫瘤標志物檢測試劑盒，采用化學發光法檢測血清 CEA、NSE 水平。
1.2.5 血清 sCD146 標本的檢測及方法
用 1×洗滌緩沖液（300 μl/孔）洗板 3 次，拍干酶標板；加入標準品和待測樣本，100 μl/孔，15 min 內完成點樣，室溫孵育 2 h；棄去孔中液體，加入 1×洗滌緩沖液（300 μl/孔）洗板 3 次，拍干酶標板；將預先配制至工作濃度的檢測抗體加入酶標板中，100 μl/孔，混勻，室溫孵育 1 h；棄去孔中液體，加入 1×洗滌緩沖液（300 μl/孔）洗板 3 次，拍干酶標板；將預先配制的底物液加入酶標板中，200 μl/孔，混勻，室溫避光孵育 20 min；加入 50 μl/孔終止液至酶標板中，輕輕震動酶標板至顯色均勻。顏色的深淺跟 sCD146 的濃度呈正相關。用酶標儀在 450 nm 波長下測定吸光度值，計算樣品濃度。
參考近 10 年的文獻，正常人血清 sCD146 的參考范圍在 0～350 ng/ml。144 例服用 TKI 藥物的肺腺癌患者血清 sCD146 均超出正常范圍。為判斷不同性別、年齡、腫瘤分期、有無遠處轉移、腫瘤直徑、病灶數量之間血清 sCD146 有無差異，以sCD146 均值為界判斷其相關性。
1.3 統計學方法
統計分析采用 SPSS 21.0 軟件。計量資料以均數±標準差（
±s）表示。不同組別之間計量資料的差異用 Tamhane 法進行均數的兩兩比較，分類資料用 χ2 檢驗；組間年齡的差異用方差分析，性別差異用 χ2 檢驗；血清 sCD146 與 CEA、NSE 的關系用 Spearman 相關分析，sCD146 與腫瘤臨床相關指標的關系用 χ2 檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 一般臨床資料
六組患者間的年齡、性別差異無統計學意義。結果見表 1。
2.2 血清 sCD146 均值的比較
由表 1 和圖 1 結果可見，未服藥組血清 sCD146 水平最低，與其他所有組差異有統計學意義（P<0.05）；服藥治療 1～3 個月組血清 sCD146 水平最高（即服藥初期水平最高），隨著服藥時間的延長且在未耐藥前血清 sCD146 水平有下降趨勢但差異無統計學意義（P>0.05）；耐藥組血清 sCD146 水平較所有服藥未耐藥組水平有明顯下降趨勢（P<0.05），但仍顯著高于未服藥組（P<0.05）；服藥治療超過 1 年未耐藥組血清 sCD146 水平與所有服藥治療在 1 年內未耐藥組水平相當（P>0.05）。
2.3 血清 CEA、NSE 均值的比較以及與血清 sCD146 的關系
六組間的血清 CEA 水平差異無統計學意義（P>0.05）。血清 NSE 水平在服藥治療 4～6 個月組與服藥治療 7～12 個月組間差異有統計學意義（P<0.05），但測量值均在正常參考范圍內，其余組間差異無統計學意義（P>0.05）。結果見表 1。血清 sCD146 與血清 CEA、NSE 無相關性（P>0.05），結果見表 2。
2.4 血清 sCD146 與腫瘤臨床相關指標的關系
144 例服用 TKI 藥物的肺腺癌患者血清 sCD146 與性別、年齡、腫瘤分期、腫瘤直徑、病灶數量無相關性（P>0.05），與有無遠處轉移有相關性（P<0.05）。結果見表 3。54 例無遠處轉移肺腺癌患者高于 sCD146 均值的比例為 61.1%，90 例伴有遠處轉移的患者高于 sCD146 均值的比例為 41.1%，伴有遠處轉移的患者高于平均血清 sCD146 濃度比例要低于不伴有遠處轉移的患者。
表1
患者血清 sCD146、CEA、NSE 水平以及腫瘤臨床相關指標（
/例）
圖1
患者血清 sCD146 濃度分布
表2
血清 sCD146 與血清 CEA、NSE 的相關系數
表3
血清 sCD146 與腫瘤臨床相關指標的關系
3 討論
EGFR 是細胞膜表面的糖蛋白受體，屬于 ErbB 受體家族，具有酪氨酸激酶活性，當與配體-EGF 結合，可使酪氨酸殘基磷酸化，激活 EGFR，促進腫瘤細胞的生長、增殖。EGFR 表達于正常上皮細胞表面，在腫瘤細胞中常過表達，EGFR 的過表達和腫瘤細胞的轉移、浸潤、預后差有關。采用 EGFR-TKI治療 EGFR 敏感突變患者療效顯著，但是無論近期效果如何，幾乎所有的患者都不可避免地出現耐藥絕大多數在 1 年內。EGFR-TKI 獲得性耐藥的機制主要包括 T790M 突變[6-7]、MET 擴增[8-9]、KRAS 突變[10]和上皮間質轉化（epithelial–mesenchymal transition，EMT）等[11]。其中 EMT 是獲得性耐藥的重要機制之一，它表現為具有極性結構的上皮細胞喪失了緊密連接的結構的過程，在該過程中，上皮細胞轉變成間質細胞形態特征，獲得了間質細胞的分子標志物，且具有了更強的侵襲和遷移能力，同時伴隨著多條信號通路的激活[12]。研究表明，CD146 作為細胞的黏連分子，是 EMT 的間質分子標志物之一，參與 EMT 的過程[13]。Ye 等[14]發現，CD146 作為 Wnt5a 的受體，通過激活非經典 Wnt 通路促進腫瘤細胞遷移。國內外的多項研究證實，EGFR 敏感細胞株經 TKI 藥物誘導耐藥后，腫瘤細胞 CD146 表達上調[13, 15-16]。我們的前期研究也證實，肺腺癌敏感突變患者耐藥后，組織病理學結果提示 CD146 表達上調[17]。由此可見 CD146 參與 EGFR-TKI 耐藥過程，但通過何種分子機制參與仍不明確。
CD146 是一種單鏈膜貫通性糖蛋白，屬免疫球蛋白超家族成員，與許多細胞黏附分子（cell adhesion molecule，CAM）有同源性[18]，參與細胞與細胞以及細胞與細胞外基質間的黏附作用，促進腫瘤生長、血行轉移，與腫瘤侵襲和轉移密切相關，可作為腫瘤侵襲與轉移的相關標志物[19-22]。細胞膜上表達的 CD146 是內皮細胞先在胞內合成 CD146 的前體（相對分子質量約 100 000），隨后在細胞膜上表達成熟的 CD146（相對分子質量約 120 000），有研究者在細胞的上清液中發現了sCD146（相對分子質量約 110 000）。它與免疫球蛋白超家族的其他可溶性分子一樣，可能對調節和控制功能很重要。研究發現惡性腫瘤患者的外周血中 sCD146 異常增高，本研究結果也顯示肺腺癌患者血清 sCD146 濃度顯著高于正常人。
大多數服用 TKI 類藥物的患者會在 1 年左右耐藥，而臨床上尚缺乏有效的監測 TKI 耐藥的血清分子標志物，因此本研究觀察肺腺癌 EGFR 敏感突變患者血清 sCD146 在不同服藥時間段的血清濃度，判斷其診斷 TKI 耐藥的價值。結果顯示未服藥組的血清 sCD146 水平最低（P<0.05），服藥初期水平最高（P<0.05），隨著服藥時間的延長血清 sCD146 水平有下降趨勢（P>0.05）；耐藥后血清 sCD146 水平有明顯下降趨勢，但仍高于未服藥組（P<0.05）。這一結果提示血清 sCD146 可能參與 TKI 類藥物耐藥的分子機制并有可能成為判斷肺腺癌 EGFR-TKI 耐藥的血清分子標志物，具有潛在的診斷價值。本研究還發現長期服用 TKI 藥物超過 1 年仍未耐藥的患者血清 sCD146 的水平與短期服用有效的患者水平相當，可見雖然血清 sCD146 水平隨著服藥時間的延長有下降趨勢，但治療有效的患者仍能夠維持較高的血清 sCD146 水平，顯示血清 sCD146 也可作為監測 TKI 類藥物藥效的血清標志物。
CEA 是相對分子質量為 22 000 的多糖蛋白復合物，屬于廣譜性腫瘤標志物，特異性不高，但在肺癌組織中有較高的表達，且水平呈動態變化，可反映患者的病情進展、病灶轉移、療效檢測及預后判定。研究表明其動態變化水平可能與 NSCLC 患者病情發展呈正相關，隨臨床分期的增加而呈增加趨勢[23]。NSE 是神經母細胞瘤的特異性標志物，小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）患者血清 NSE 明顯增高，研究認為 NSE 是 SCLC 臨床診斷敏感性和特異性最強的腫瘤標志物，而接受靶向治療的肺腺癌患者有部分患者病理類型轉化為 SCLC[24-26]，但轉化機制尚不明確。因此，我們在檢測血清 sCD146 同時也檢測了血清 CEA、NSE 水平，同時分析 sCD146 與 CEA、NSE 的相關關系，判斷 CEA、NSE 能否成為判斷 TKI 類藥物耐藥的血清學指標。結果顯示，血清 NSE 水平絕大多數在參考范圍內，服藥治療 4～6 個月組與 7～12 個月組差異有統計學意義（P<0.05），但均值均在正常參考范圍內，其余組差異無統計學意義（P>0.05），考慮主要由血清 NSE 在肺腺癌患者中的敏感性、特異性均不高引起；絕大部分患者血清 CEA 水平高于正常值，但組間差異無統計學意義（P>0.05），可能與入選的患者大多數處于肺癌晚期有關。以上結果說明對于晚期服用 TKI 類藥物的患者，CEA、NSE 并不能成為判斷 TKI 類藥物耐藥的血清學指標。血清 sCD146 與有無遠處轉移相關，伴有遠處轉移的患者血清 sCD146 有下降趨勢，這與耐藥后血清 sCD146 的下降趨勢一致；血清 sCD146 與其他腫瘤臨床相關指標（性別、年齡、腫瘤分期、腫瘤直徑、病灶數量）無相關性（P>0.05），進一步分析發現該結果與大多數入選患者處于腫瘤晚期有關。若 TKI 類藥物能廣泛用于早期患者或者擴大樣本量增加早期患者入選數，結果可能會有所不同。
耐藥后的細胞組織學水平上 CD146 表達上調，而血清 sCD146 表達下降，猜測耐藥后的上皮細胞內使細胞膜上表達的成熟 CD146 脫落為 sCD146 的某種酶表達下降，從而導致耐藥后組織學和血清學的變化，但具體機制尚不明了，有待進一步深入研究。其次，因本研究既往無相關研究報道，采用的是類似橫斷面的研究方法，是在同一時間段檢測處于不同服藥時間的患者血清，如若采用隨訪的方法觀察同一批患者在不同服藥時間的血清差異，將更有說服力，也有待以后研究的進一步驗證。本研究結果雖然顯示血清 sCD146 水平有可能成為監測 TKI 藥效和判斷 TKI 耐藥的血清學指標，但距真正有臨床實用價值尚有一定距離。該結論還有待通過多中心、大樣本的臨床研究驗證。
