引用本文： 張濤, 李智偉, 徐輝. Treg/Th17細胞免疫平衡紊亂與急性胰腺炎疾病進展相關性研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2022, 29(7): 892-896. doi: 10.7507/1007-9424.202110012 復制
急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是普外科常見急腹癥之一，具有較高的發病率，據文獻[1-2]報道，AP的平均發病率約19/10萬人。AP是由于胰酶在胰腺內激活引起胰腺局部發生炎癥反應，導致胰腺缺血壞死[3]；多數患者不會發生重癥胰腺炎[4]；但仍有20%發展為重癥胰腺炎，病死率達30%～50%，總體病死率約為5%[5-8]。越來越多的學者[9-11]認為，調節性T細胞（regulatory T cell，Treg）/輔助性T細胞17（helper T cell 17，Th17）免疫平衡紊亂可能是AP進展的關鍵因素。國內罕有文獻對Treg/Th17細胞免疫平衡紊亂在AP發病過程中作用的報道，多集中在少量動物模型相關研究和外周血淋巴細胞亞群的變化方面[12]。本研究通過流式細胞術對Treg和Th17細胞以及相關細胞因子白細胞介素（interleukin，IL）-10和IL-17進行分析，探討AP進展過程中Treg/Th17細胞免疫平衡特點，旨在為AP的治療方案選擇及判斷預后和疾病轉歸提供依據，也為AP的免疫治療提供一定的思路和方向。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選取2020年1–12月期間在新疆維吾爾自治區人民醫院就診并明確診斷為AP的患者以及同期行健康體檢者作為研究對象，分別為AP組和正常對照組。納入標準：① AP診斷及分類符合《中國急性胰腺炎診治指南（2019，沈陽）》標準[7]，即符合以下3項特征中的2項即可診斷為AP：與AP臨床表現相符合的腹痛、腹脹、惡心、嘔吐等表現；血清淀粉酶和（或）脂肪酶活性至少高于正常上限值3倍；患者經腹部超聲及腹部增強 CT檢查符合AP的臨床診斷標準[7]。② 年齡≥20歲。③ 發病3 d內入院者。排除標準：① 伴有妊娠、創傷、免疫缺陷疾病，急、慢性肝炎，終末期肝、腎疾病和惡性腫瘤患者。 ② 慢性胰腺炎。 ③ 近1個月內使用過免疫抑制劑者。所有納入研究對象均簽署知情同意書，本研究通過了新疆維吾爾自治區人民醫院倫理委員會的批準，批文編號：新疆區醫院倫理委員會KY20180118102。
1.2 主要儀器與試劑
使用美國BD公司的BD FACS canto plus流式細胞儀。CD3 多甲藻黃素葉綠素蛋白（peridinin chlorophyll protein，PerCP；552851，SP34-2），CD4 異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC；550628，L200），CD25 別藻青蛋白（allophycocyanin，APC；555434、M-A251），CD127 藻紅蛋白（phycoerythrin，PE；561028、HIL-7R-M21），CD3 FITC（349201、SK7）CD4 PE（340670、SK3），IL-17 多甲藻黃素-葉綠素蛋白質復合物-青藍素耦聯物（peridinin-chlorophyll-protein-cyanine 5.5，PerCP-Cy5.5；560799、N49-653）和溶血素（349202）試劑均購于美國BD公司。檢測IL-10和IL-17的Aimplex試劑盒購自北京曠博公司。
1.3 治療
患者確診AP后，其中2例積極給予內科治療后效果欠佳，發展為重癥AP，行開腹胰腺壞死組織清除引流手術，術后給予抗感染、腹腔沖洗引流、抑酶、補液等對癥治療后康復出院，其余患者均積極給予禁食水、胃腸減壓、抗感染、鎮痛解痙、抑酶、中藥通下、營養支持補液等內科治療后康復出院。
1.4 方法
1.4.1 樣本采集與處理
采集AP組治療前后和正常對照組人群外周血液標本5 mL，使用乙二胺四乙酸抗凝。AP組治療前采樣時間為患者入院完善腹部CT及相關檢查、明確診斷為AP后立即采血；AP組治療后采樣時間為患者經治療后，觀察患者腹部癥狀、體征，復查腹部CT及相關實驗室檢查，確定AP基本痊愈后采血。采集的血液標本分為3管，1管直接使用流式細胞儀檢測Treg細胞，1管檢測Th17細胞；另1管行3 000 r/min（離心半徑9 cm）離心5 min后，將上清吸至EP管，保存于–80 ℃低溫冰箱，用于IL-10和IL-17水平的檢測。
1.4.2 Treg及Th17細胞數量檢測
① Treg細胞檢測：吸取全血樣本100 μL，加入CD3 PerCP 20 μL、CD4 FITC 20 μL、CD25 APC 5 μL及CD127 PE 20 μL，設置空白對照管吸取全血樣本100 μL，只加入CD3 PerCP 20 μL和CD4 FITC 20 μL。② Th17細胞檢測：吸取全血樣本100 μL，加入CD3 FITC 20 μL、CD4 PE 20 μL及IL-17 PerCP-Cy5.5 20 μL。 設置空白對照管吸取全血樣本100 μL，只加入CD3 FITC 20 μL和CD4 PE 20 μL。③ 上述兩樣本處理完畢后避光室溫放置15 min，加入2 mL溶血素10 min后離心（1 500 r/min、5 min、離心半徑9 cm）去上清，加入2 mL磷酸鹽緩沖液洗滌離心（1 500 r/min、5 min、離心半徑9 cm）去上清，加入500 μL磷酸鹽緩沖液，重懸。上BD FACS canto plus流式細胞儀檢測，數據使用FlowJo 10.0進行數據分析，根據各自的空白對照以確定Treg細胞和Th17細胞的數值。
1.4.3 IL-10和IL-17水平檢測
使用Aimplex試劑盒檢測。將凍存的EP管取出，依照Aimplex試劑盒說明書準備標準品和樣品，使用BD FACS canto Ⅱ流式細胞儀檢測熒光球，保存流式細胞儀的標準化流式細胞術列表模式數據文件（flow cytometry data file standard，FCS），利用軟件FCAP Array 3.0進行數據分析。使用試劑盒自帶的標準品制備標準曲線，根據標準曲線確定檢測指標的水平。
1.5 統計學方法
所有數據使用SPSS 20進行統計學分析。計量資料如年齡、體質量指數（body mass index，BMI）、Treg細胞數、Th17細胞數以及IL-10和IL-17水平數據根據Q-Q圖確定均滿足正態性分布并符合方差齊性分布，組間比較采用成組t 檢驗。計數資料如性別和基礎疾病組間比較使用成組χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 臨床資料
本研究共納入AP患者40例，年齡30～47歲、（39±7.5）歲；正常對照組40人，年齡30～44歲、（37±6.6）歲。2組研究對象在年齡、性別、BMI和基礎疾病（高血壓、糖尿病、高脂血癥、冠心病）方面的差異均無統計學意義（P>0.05），具體見表1。
表1
AP組與正常對照組的基本資料（n=40）
2.2 流式細胞術檢測Treg細胞及Th17細胞結果
使用流式細胞術檢測的Treg和Th17細胞數量結果見表2。 由表2可見： 與正常對照組相比，AP組治療前的Treg和Th17細胞比例均增高，差異有統計學意義（P<0.001），AP組治療后的Treg和Th17細胞比例也增高，但差異無統計學意義（P>0.05）；AP組治療后與AP組治療前比較，Treg和Th17細胞比例均下降，差異有統計學意義（P<0.001）。
表2
Treg和Th17細胞以及IL-10和IL-17水平檢測結果（
）
2.3 IL-17和IL-10水平檢測結果
結果見表2。由表2可見：與正常對照組相比，AP組治療前的IL-17和 IL-10水平均增高，差異有統計學意義（P<0.001）；AP組治療后的IL-17增高，但差異無統計學意義（P>0.05），而IL-10水平增高其差異有統計學意義（P<0.001）。AP組治療后與AP組治療前相比，IL-17和 IL-10水平均水平均下降，差異有統計學意義（P<0.001）。
3 討論
AP 是胰腺的一種突發炎性疾病，具有起病急、病情發展快、預后差等特點[13]，如何預防和治療是目前醫學界面臨的主要問題。就目前而言，AP預后的關鍵依然是早發現、早診斷和早治療。因此，尋找AP的發病誘因、機理和臨床特點是目前臨床基礎研究的熱點[14]。在AP的發病機制中，多種免疫細胞及免疫分子參與了胰腺炎的發生和發展[15-16]，其主要表現為免疫平衡紊亂。有研究[17]證實，AP與Th17細胞和Treg細胞比例及其分泌的細胞因子有關。
Treg細胞是一類控制體內自身免疫反應的T細胞亞群，不同于輔助性 T 細胞 1（T helper 1 cell，Th1）和輔助性 T 細胞2（T helper 2 cell，Th2），是對Th1和Th2免疫平衡理論的一項重要補充，其是一種負向免疫調控細胞，介導Th1和Th2細胞的漂移，在控制胰腺炎病情進展方面起到了關鍵作用[18]。研究[19]證實，Treg細胞主要通過分泌IL-10、IL-4、轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）等細胞因子從而維持體內免疫環境的相對穩定，防止自身免疫性疾病的發生。本研究發現，Treg細胞比例在AP組治療前高于正常對照組，而AP組治療后卻低于AP組治療前，并且其分泌的IL-10也增高，提示Treg細胞在具有促炎作用的Th17細胞比例明顯升高的同時也有升高，以維持體內免疫環境的相對穩定，在控制胰腺炎病情進展方面起到了關鍵作用。
Th17細胞作為目前新發現的T細胞亞群，在參加免疫反應中，其作用與Th1/Th2細胞大不相同，其細胞主要分泌IL-17、IL-6等細胞因子[20]，并通過這類細胞因子達到募集和活化中性粒細胞的作用，Th17的比例失衡是導致AP相關的促炎-抗炎失調的重要原因之一。Th17細胞比例的升高，在多種感染性疾病中都得到了證實，IL-17作為促炎因子，其表達升高可放大免疫級聯反應，加速機體炎癥進展[21]。本研究結果顯示：Th17細胞比例AP組治療前高于正常對照組，而AP組治療后卻低于AP組治療前；其IL-17水平的變化同Th17細胞一樣。該結果提示Th17細胞在AP發生中起到了一定的促進作用。
文獻[22]報道Treg/Th17平衡紊亂與AP疾病進展密切相關。在正常情況下，機體沒有受到炎癥剌激時，TGF-β1誘導Th0分化為Treg細胞，抑制自身免疫來維持機體免疫系統的自身免疫耐受。AP時，Treg細胞的活化受到促進，同時Th17細胞的活化增殖明顯，分泌IL-17細胞因子，形成促炎性反應，二者通過免疫網絡保持抗炎-抑炎的平衡[23]。當機體損傷時，抗炎-抑炎的平衡被打破，Th17活化增殖，分泌IL-17細胞因子，促進了AP的發生發展[24]。
Treg/Th17細胞變化特點和相關細胞因子的改變也可以指導AP的治療方案，改善疾病的轉歸。本研究結果證實，發生AP后機體Th17細胞活化增殖，分泌IL-17細胞因子介導炎癥反應，可加快AP進展，同時機體Treg細胞增殖進行保護，經有效治療后Th17細胞比例明顯下降，但Treg較正常組仍略高，可能仍處于保護機體的狀態，通過檢測外周血Treg/Th17細胞動態變化以評估疾病進展，并且能夠預測疾病的預后與轉歸。馬志蘭等[25] 的研究結果也證實了Treg/Th17細胞平衡在AP并發多臟器功能障礙綜合征的發生發展中所發揮的作用。
綜上所述，Th17 細胞介導炎癥反應，Treg 細胞介導免疫抑制，兩者的分化過程和功能相互制約。本研究檢測了AP患者外周血Treg細胞和Th17細胞比例及血漿中IL-17和IL-10的水平，結果也證實了Treg/Th17細胞平衡紊亂與AP的發生及病情進展有關，為AP的治療方案選擇及判斷預后和疾病轉歸提供了依據，同時該研究也為AP的免疫治療提供了一定的思路和方向。
重要聲明
利益沖突聲明：本文章不涉及利益沖突。
作者貢獻聲明：張濤負責病例收集、數據統計和論文撰寫；徐輝負責課題設計及論文修改；李智偉負責文獻檢索及數據分析。
倫理聲明：本研究已通過新疆維吾爾自治區人民醫院倫理委員會的審批（批文編號：新疆區醫院倫理委員會 KY20180118102）。
急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是普外科常見急腹癥之一，具有較高的發病率，據文獻[1-2]報道，AP的平均發病率約19/10萬人。AP是由于胰酶在胰腺內激活引起胰腺局部發生炎癥反應，導致胰腺缺血壞死[3]；多數患者不會發生重癥胰腺炎[4]；但仍有20%發展為重癥胰腺炎，病死率達30%～50%，總體病死率約為5%[5-8]。越來越多的學者[9-11]認為，調節性T細胞（regulatory T cell，Treg）/輔助性T細胞17（helper T cell 17，Th17）免疫平衡紊亂可能是AP進展的關鍵因素。國內罕有文獻對Treg/Th17細胞免疫平衡紊亂在AP發病過程中作用的報道，多集中在少量動物模型相關研究和外周血淋巴細胞亞群的變化方面[12]。本研究通過流式細胞術對Treg和Th17細胞以及相關細胞因子白細胞介素（interleukin，IL）-10和IL-17進行分析，探討AP進展過程中Treg/Th17細胞免疫平衡特點，旨在為AP的治療方案選擇及判斷預后和疾病轉歸提供依據，也為AP的免疫治療提供一定的思路和方向。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選取2020年1–12月期間在新疆維吾爾自治區人民醫院就診并明確診斷為AP的患者以及同期行健康體檢者作為研究對象，分別為AP組和正常對照組。納入標準：① AP診斷及分類符合《中國急性胰腺炎診治指南（2019，沈陽）》標準[7]，即符合以下3項特征中的2項即可診斷為AP：與AP臨床表現相符合的腹痛、腹脹、惡心、嘔吐等表現；血清淀粉酶和（或）脂肪酶活性至少高于正常上限值3倍；患者經腹部超聲及腹部增強 CT檢查符合AP的臨床診斷標準[7]。② 年齡≥20歲。③ 發病3 d內入院者。排除標準：① 伴有妊娠、創傷、免疫缺陷疾病，急、慢性肝炎，終末期肝、腎疾病和惡性腫瘤患者。 ② 慢性胰腺炎。 ③ 近1個月內使用過免疫抑制劑者。所有納入研究對象均簽署知情同意書，本研究通過了新疆維吾爾自治區人民醫院倫理委員會的批準，批文編號：新疆區醫院倫理委員會KY20180118102。
1.2 主要儀器與試劑
使用美國BD公司的BD FACS canto plus流式細胞儀。CD3 多甲藻黃素葉綠素蛋白（peridinin chlorophyll protein，PerCP；552851，SP34-2），CD4 異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC；550628，L200），CD25 別藻青蛋白（allophycocyanin，APC；555434、M-A251），CD127 藻紅蛋白（phycoerythrin，PE；561028、HIL-7R-M21），CD3 FITC（349201、SK7）CD4 PE（340670、SK3），IL-17 多甲藻黃素-葉綠素蛋白質復合物-青藍素耦聯物（peridinin-chlorophyll-protein-cyanine 5.5，PerCP-Cy5.5；560799、N49-653）和溶血素（349202）試劑均購于美國BD公司。檢測IL-10和IL-17的Aimplex試劑盒購自北京曠博公司。
1.3 治療
患者確診AP后，其中2例積極給予內科治療后效果欠佳，發展為重癥AP，行開腹胰腺壞死組織清除引流手術，術后給予抗感染、腹腔沖洗引流、抑酶、補液等對癥治療后康復出院，其余患者均積極給予禁食水、胃腸減壓、抗感染、鎮痛解痙、抑酶、中藥通下、營養支持補液等內科治療后康復出院。
1.4 方法
1.4.1 樣本采集與處理
采集AP組治療前后和正常對照組人群外周血液標本5 mL，使用乙二胺四乙酸抗凝。AP組治療前采樣時間為患者入院完善腹部CT及相關檢查、明確診斷為AP后立即采血；AP組治療后采樣時間為患者經治療后，觀察患者腹部癥狀、體征，復查腹部CT及相關實驗室檢查，確定AP基本痊愈后采血。采集的血液標本分為3管，1管直接使用流式細胞儀檢測Treg細胞，1管檢測Th17細胞；另1管行3 000 r/min（離心半徑9 cm）離心5 min后，將上清吸至EP管，保存于–80 ℃低溫冰箱，用于IL-10和IL-17水平的檢測。
1.4.2 Treg及Th17細胞數量檢測
① Treg細胞檢測：吸取全血樣本100 μL，加入CD3 PerCP 20 μL、CD4 FITC 20 μL、CD25 APC 5 μL及CD127 PE 20 μL，設置空白對照管吸取全血樣本100 μL，只加入CD3 PerCP 20 μL和CD4 FITC 20 μL。② Th17細胞檢測：吸取全血樣本100 μL，加入CD3 FITC 20 μL、CD4 PE 20 μL及IL-17 PerCP-Cy5.5 20 μL。 設置空白對照管吸取全血樣本100 μL，只加入CD3 FITC 20 μL和CD4 PE 20 μL。③ 上述兩樣本處理完畢后避光室溫放置15 min，加入2 mL溶血素10 min后離心（1 500 r/min、5 min、離心半徑9 cm）去上清，加入2 mL磷酸鹽緩沖液洗滌離心（1 500 r/min、5 min、離心半徑9 cm）去上清，加入500 μL磷酸鹽緩沖液，重懸。上BD FACS canto plus流式細胞儀檢測，數據使用FlowJo 10.0進行數據分析，根據各自的空白對照以確定Treg細胞和Th17細胞的數值。
1.4.3 IL-10和IL-17水平檢測
使用Aimplex試劑盒檢測。將凍存的EP管取出，依照Aimplex試劑盒說明書準備標準品和樣品，使用BD FACS canto Ⅱ流式細胞儀檢測熒光球，保存流式細胞儀的標準化流式細胞術列表模式數據文件（flow cytometry data file standard，FCS），利用軟件FCAP Array 3.0進行數據分析。使用試劑盒自帶的標準品制備標準曲線，根據標準曲線確定檢測指標的水平。
1.5 統計學方法
所有數據使用SPSS 20進行統計學分析。計量資料如年齡、體質量指數（body mass index，BMI）、Treg細胞數、Th17細胞數以及IL-10和IL-17水平數據根據Q-Q圖確定均滿足正態性分布并符合方差齊性分布，組間比較采用成組t 檢驗。計數資料如性別和基礎疾病組間比較使用成組χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 臨床資料
本研究共納入AP患者40例，年齡30～47歲、（39±7.5）歲；正常對照組40人，年齡30～44歲、（37±6.6）歲。2組研究對象在年齡、性別、BMI和基礎疾病（高血壓、糖尿病、高脂血癥、冠心病）方面的差異均無統計學意義（P>0.05），具體見表1。
表1
AP組與正常對照組的基本資料（n=40）
2.2 流式細胞術檢測Treg細胞及Th17細胞結果
使用流式細胞術檢測的Treg和Th17細胞數量結果見表2。 由表2可見： 與正常對照組相比，AP組治療前的Treg和Th17細胞比例均增高，差異有統計學意義（P<0.001），AP組治療后的Treg和Th17細胞比例也增高，但差異無統計學意義（P>0.05）；AP組治療后與AP組治療前比較，Treg和Th17細胞比例均下降，差異有統計學意義（P<0.001）。
表2
Treg和Th17細胞以及IL-10和IL-17水平檢測結果（）
2.3 IL-17和IL-10水平檢測結果
結果見表2。由表2可見：與正常對照組相比，AP組治療前的IL-17和 IL-10水平均增高，差異有統計學意義（P<0.001）；AP組治療后的IL-17增高，但差異無統計學意義（P>0.05），而IL-10水平增高其差異有統計學意義（P<0.001）。AP組治療后與AP組治療前相比，IL-17和 IL-10水平均水平均下降，差異有統計學意義（P<0.001）。
3 討論
AP 是胰腺的一種突發炎性疾病，具有起病急、病情發展快、預后差等特點[13]，如何預防和治療是目前醫學界面臨的主要問題。就目前而言，AP預后的關鍵依然是早發現、早診斷和早治療。因此，尋找AP的發病誘因、機理和臨床特點是目前臨床基礎研究的熱點[14]。在AP的發病機制中，多種免疫細胞及免疫分子參與了胰腺炎的發生和發展[15-16]，其主要表現為免疫平衡紊亂。有研究[17]證實，AP與Th17細胞和Treg細胞比例及其分泌的細胞因子有關。
Treg細胞是一類控制體內自身免疫反應的T細胞亞群，不同于輔助性 T 細胞 1（T helper 1 cell，Th1）和輔助性 T 細胞2（T helper 2 cell，Th2），是對Th1和Th2免疫平衡理論的一項重要補充，其是一種負向免疫調控細胞，介導Th1和Th2細胞的漂移，在控制胰腺炎病情進展方面起到了關鍵作用[18]。研究[19]證實，Treg細胞主要通過分泌IL-10、IL-4、轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）等細胞因子從而維持體內免疫環境的相對穩定，防止自身免疫性疾病的發生。本研究發現，Treg細胞比例在AP組治療前高于正常對照組，而AP組治療后卻低于AP組治療前，并且其分泌的IL-10也增高，提示Treg細胞在具有促炎作用的Th17細胞比例明顯升高的同時也有升高，以維持體內免疫環境的相對穩定，在控制胰腺炎病情進展方面起到了關鍵作用。
Th17細胞作為目前新發現的T細胞亞群，在參加免疫反應中，其作用與Th1/Th2細胞大不相同，其細胞主要分泌IL-17、IL-6等細胞因子[20]，并通過這類細胞因子達到募集和活化中性粒細胞的作用，Th17的比例失衡是導致AP相關的促炎-抗炎失調的重要原因之一。Th17細胞比例的升高，在多種感染性疾病中都得到了證實，IL-17作為促炎因子，其表達升高可放大免疫級聯反應，加速機體炎癥進展[21]。本研究結果顯示：Th17細胞比例AP組治療前高于正常對照組，而AP組治療后卻低于AP組治療前；其IL-17水平的變化同Th17細胞一樣。該結果提示Th17細胞在AP發生中起到了一定的促進作用。
文獻[22]報道Treg/Th17平衡紊亂與AP疾病進展密切相關。在正常情況下，機體沒有受到炎癥剌激時，TGF-β1誘導Th0分化為Treg細胞，抑制自身免疫來維持機體免疫系統的自身免疫耐受。AP時，Treg細胞的活化受到促進，同時Th17細胞的活化增殖明顯，分泌IL-17細胞因子，形成促炎性反應，二者通過免疫網絡保持抗炎-抑炎的平衡[23]。當機體損傷時，抗炎-抑炎的平衡被打破，Th17活化增殖，分泌IL-17細胞因子，促進了AP的發生發展[24]。
Treg/Th17細胞變化特點和相關細胞因子的改變也可以指導AP的治療方案，改善疾病的轉歸。本研究結果證實，發生AP后機體Th17細胞活化增殖，分泌IL-17細胞因子介導炎癥反應，可加快AP進展，同時機體Treg細胞增殖進行保護，經有效治療后Th17細胞比例明顯下降，但Treg較正常組仍略高，可能仍處于保護機體的狀態，通過檢測外周血Treg/Th17細胞動態變化以評估疾病進展，并且能夠預測疾病的預后與轉歸。馬志蘭等[25] 的研究結果也證實了Treg/Th17細胞平衡在AP并發多臟器功能障礙綜合征的發生發展中所發揮的作用。
綜上所述，Th17 細胞介導炎癥反應，Treg 細胞介導免疫抑制，兩者的分化過程和功能相互制約。本研究檢測了AP患者外周血Treg細胞和Th17細胞比例及血漿中IL-17和IL-10的水平，結果也證實了Treg/Th17細胞平衡紊亂與AP的發生及病情進展有關，為AP的治療方案選擇及判斷預后和疾病轉歸提供了依據，同時該研究也為AP的免疫治療提供了一定的思路和方向。
重要聲明
利益沖突聲明：本文章不涉及利益沖突。
作者貢獻聲明：張濤負責病例收集、數據統計和論文撰寫；徐輝負責課題設計及論文修改；李智偉負責文獻檢索及數據分析。
倫理聲明：本研究已通過新疆維吾爾自治區人民醫院倫理委員會的審批（批文編號：新疆區醫院倫理委員會 KY20180118102）。
