引用本文： 陳灶妹, 趙月, 何婷, 陳柯君, 江麗, 張俊輝, 萬華印, 李茹冰. PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜對大鼠腹腔術后粘連的預防作用研究. 中國修復重建外科雜志, 2017, 31(8): 999-1005. doi: 10.7507/1002-1892.201703083 復制
腹腔粘連是腹部外科手術常見難題之一，術后粘連發生率可達 50%～95%[1]，常導致腹痛、腸梗阻、不孕等嚴重并發癥[2-4]。目前，最基本的粘連防治方法是提高手術技巧，但也不能完全避免損傷。此外，臨床也使用藥物或者給予腹腔沖洗、屏障材料以預防粘連發生。其中，預防腹腔粘連效果最佳的手段是使用屏障材料，現已研發出各種聚合物制成的膜狀或片狀屏障材料[5-6]，然而這些材料存在操作時易受損、生物降解性不穩定等缺陷[7-8]，大大限制了其臨床效果。因此尋找穩定性更好、生物相容性良好的防粘連材料對于預防腹腔術后粘連具有重要意義。目前，臨床應用的腹腔防粘連產品多需二次手術取出，而近年可生物降解并自行吸收的復合材料在預防肌腱粘連等方面顯示了良好的應用前景[9-11]，因此研究傾向于使用此類材料制備腹腔防粘連產品。
聚乳酸/乙醇酸共聚物（poly-L-lactic/glycolic acid，PLGA）具有較高的生物相容性，并對生物體無危害[12-13]，但其在力學性能和親水性能方面存在不足。在 PLGA 中添加親水性聚合物聚乙二醇（pol-yethylene glycol，PEG），并利用靜電紡絲技術制備 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜，不但能增加親水性和柔韌性，而且更易貼附創面，不易脫落[14]。本實驗旨在通過建立大鼠腹腔粘連模型，研究 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜對大鼠術后腹腔粘連的預防作用，為 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜用于臨床提供實驗依據。報告如下。
1 材料與方法
1.1 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜的制備
本實驗 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜由廣州市電紡生物科技有限公司制備。將 PLGA 和 PEG 按照 19∶1（M/M）混合后，溶解于有機溶劑中獲得電紡液，通過靜電紡絲技術制備成 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜。靜電紡絲條件：電壓 20 kV，流速 0.6 m/h，接收距離 20 cm，接收速度 150 r/min；于 40℃ 真空干燥 3 h，除去殘留溶劑，并行 25 kGy 輻照滅菌。
大體觀察 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜物理外觀形態，并用數顯千分測厚規（上海川陸量具有限公司）測定膜厚度，掃描電鏡測定膜微觀形貌以及纖維直徑。根據 GBT 16886.19-2011 醫療器械生物學評價第 19 部分標準，選擇柔軟質韌、具有適宜厚度，且掃描電鏡結果顯示具有均一、無串珠纖維形態的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜進行實驗。
1.2 實驗分組及方法
成年 SPF 級 SD 大鼠 54 只，雌雄各半，體質量 180～200 g，購于廣東省醫學實驗動物中心，適應性飼養 1 周后進行實驗。將 54 只大鼠隨機分為 3 組，其中正常對照組 6 只、模型組 24 只、PLGA/PEG 組 24 只。正常對照組大鼠不進行任何處理。模型組及 PLGA/PEG 組制備腹腔粘連模型，制備方法參考文獻[15-16]并加以改進。大鼠術前禁食 24 h，稱重后按 3.5 mL/kg 標準腹腔注射水合氯醛麻醉，腹部剃毛，仰臥位固定于手術板。沿腹中線作縱行切口，逐層剪開皮膚和肌層，暴露臟器，取出盲腸置于無菌紗布上，待漿膜干燥后，用病理切片刀輕刮盲腸表面，直至呈現明顯點狀滲血，滴加 1～2 滴 95% 乙醇加速滲血并立即擦干。模型組直接將盲腸放回腹腔；PLGA/PEG 組將大小為 1.5 cm×1.0 cm 的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜覆蓋創面后，再將盲腸放回腹腔內。最后，在盲腸對應側用醫用組織鉗將腹壁夾傷，并使盲腸與受損腹壁相對。縫合肌層和皮膚，關閉切口。術后肌肉注射青霉素，每天 1 次，連續 2 d；聚維酮碘聯合 75% 乙醇消毒，每天 1 次，連續 3 d。
模型組和 PLGA/PEG 組分別于術后 3 d 及 1、2、8 周各取 6 只大鼠進行觀測，正常對照組于實驗結束時取 6 只大鼠進行觀測。
1.3 觀測指標
1.3.1 一般情況 術后觀察模型組及 PLGA/PEG 組大鼠成活情況，如發生死亡進行及時解剖觀察，并對應補充大鼠。同時觀察大鼠切口愈合、飲食及活動等。
1.3.2 大體觀察 取各時間點大鼠麻醉后，按照原切口入路，肉眼觀察各組盲腸與創傷腹壁間粘連情況，以及各器官和組織的變化。參考 Belluco 法[17]和 Phillips 法[18]，自定腹腔粘連程度評級標準，包括粘連面積以及分離難易程度兩方面。0 級，無粘連；Ⅰ 級，粘連面積≤25%，易于分離；Ⅱ 級，粘連面積 25%～50%，分離容易，可牽引分離；Ⅲ 級，粘連面積 50%～75%，分離較困難，需鈍性分離；Ⅳ 級，粘連面積 75%～100%，分離困難，需銳性分離。肉眼觀察 PLGA/PEG 組各時間點 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜降解情況。
1.3.3 組織學觀察 各時間點大體觀察后，模型組和 PLGA/PEG 組取盲腸手術部位和腹壁組織，正常對照組取對應部位組織，置于 10% 甲醛溶液固定，脫水，包埋，常規石蠟切片，片厚 4 μm，HE 染色，光鏡檢查大鼠腸管結構形態、纖維結締組織增生及炎性細胞浸潤情況。
1.4 統計學方法
采用 SPSS16.0 統計軟件進行分析。等級資料組間比較采用 Kruskal-Wallis H 檢驗；檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜觀察
采用靜電紡絲技術成功制備 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜，呈白色、不透明狀薄膜，質地柔軟，表面光滑。掃描電鏡觀察示，PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜主要由纖維無序交錯堆積而成，使膜具備微孔結構，纖維直徑為 0.8～1.0 μm；膜厚度 0.04～0.06 mm。見圖1。
圖1
PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜觀察
a. 大體觀察；b. 掃描電鏡觀察（×5 000）
Figure1. Observation of PLGA/PEG electrospun polymer membranea. Gross observation; b. Scanning electron microscope observation (×5 000)
2.2 動物實驗觀察
2.2.1 一般情況 模型組及 PLGA/PEG 組大鼠術后均存活至實驗完成，切口愈合良好，飲食正常。
2.2.2 大體觀察 ① PLGA/PEG 膜植入體內后降解情況：PLGA/PEG 組術后 3 d，大鼠腹部、腸體正常，PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜貼附于盲腸創面，呈白色或乳白色狀態，其中 5 只可見膜折疊；術后 1 周，大鼠腹部、腸體均正常，膜仍貼附于盲腸創面上，呈白色，其邊緣有皺褶；術后 2 周，大鼠肝葉邊緣均變鈍，盲腸創面見半透膜貼附，膜較前明顯縮小；術后 8 周，可見膜碎裂降解，僅見膜大致輪廓或降解完全。見圖 2。
圖2
各時間點 PLGA/PEG 組腹腔粘連及 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜大體觀察
箭頭示 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜 a. 術后 3 d；b. 術后 1 周；c. 術后 2 周；d. 術后 8 周
Figure2. Observation of intraperitoneal adhesion and PLGA/PEG electrospun polymer membrane in PLGA/PEG group at each time pointArrow indicated the PLGA/PEG electrospun polymer membrane a. At 3 days after operation; b. At 1 week after operation; c. At 2 weeks after operation; d. At 8 weeks after operation
②腹腔粘連程度觀察：正常對照組：大鼠盲腸與腹壁結構清晰，無粘連，參照自定分級標準均為 0 級。模型組：術后 3 d 可見腹腔粘連發生，隨時間延長，盲腸與腹壁粘連程度逐漸加重，至術后 8 周時粘連難以分離；PLGA/PEG 組粘連程度比模型組輕，盲腸與腹壁易于分離。見圖 2、3。組間比較示，各時間點，模型組腹腔粘連程度均明顯高于正常對照組及 PLGA/PEG 組（P<0.05）；PLGA/PEG 組與正常對照組比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表 1。
圖3
各時間點正常對照組及模型組腹腔粘連程度觀察
a. 正常對照組；b. 模型組術后 3 d；c. 模型組術后 1 周；d. 模型組術后 2 周；e. 模型組術后 8 周
Figure3. Observation of the intraperitoneal adhesion in control group and model group at each time pointa. Control group; b. Model group at 3 days after operation; c. Model group at 1 week after operation; d. Model group at 2 weeks after operation; e. Model group at 8 weeks after operation
表1
各時間點模型組及 PLGA/PEG 組腹腔粘連分級比較
Table1.
Comparison of intraperitoneal adhesion between model group and PLGA/PEG group at each time point
2.2.3 組織學觀察 正常對照組大鼠腸管形態和結構均正常，未見纖維結締組織增生和炎性細胞浸潤等異常情況。模型組：術后 3 d，見纖維蛋白滲出，開始出現纖維性粘連；術后 1、2 周，肌層不明顯，纖維細胞和間皮細胞融合，并最終形成血管樣粘連，盲腸有大量纖維結締組織增生，小血管明顯增多，成纖維細胞活躍增長，黏膜下層伴有嚴重炎性細胞浸潤；術后 8 周，肌層增厚。PLGA/PEG 組：各時間點與模型組相比，盲腸纖維結締組織增生明顯減緩，粘連程度明顯降低，僅見少量炎性細胞浸潤。見表 2～5 及圖 4。
圖4
各組組織學觀察（HE×100）
a. 正常對照組；b. 模型組術后 3 d；c. 模型組術后 1 周；d. 模型組術后 2 周；e. 模型組術后 8 周；f. PLGA/PEG 組術后 3 d；g. PLGA/PEG 組術后 1 周；h. PLGA/PEG 組術后 2 周；i. PLGA/PEG 組術后 8 周
Figure4. Histological observation in each group (HE×100)a. Control group; b. Model group at 3 days after operation; c. Model group at 1 week after operation; d. Model group at 2 weeks after operation; e. Model group at 8 weeks after operation; f. PLGA/PEG group at 3 days after operation; g. PLGA/PEG group at 1 week after operation; h. PLGA/PEG group at 2 weeks after operation; i. PLGA/PEG group at 8 weeks after operation
表2
術后 3 d 模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table2.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 3 days after operation
表3
術后 1 周模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table3.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 1 weeks after operation
表4
術后 2 周模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table4.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 2 weeks after operation
表5
術后 8 周模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table5.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 8 weeks after operation
3 討論
PLGA 是可生物降解復合高分子材料，它由乳酸和乙醇酸聚合而成，主要用于組織工程血管、多孔微球和緩釋控釋材料等領域研究。PEG 無毒且具有良好水溶性。本研究將 PEG 加入 PLGA 中，利用靜電紡絲技術成功制備 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜。該膜呈白色、不透明狀薄膜，質地柔軟，表面光滑。與傳統濕法紡絲、干法紡絲等工藝制備的膜相比，靜電紡絲技術制備的膜具有纖維直徑小、比表面積大、孔隙率高、長徑比大、力學性能好等優點[19]；有研究表明[20-22]，其微孔結構與細胞外基質類似，可加速細胞增殖，促進組織修復。此外，本研究制備的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜黏附性能良好，能穩定貼附于創口而無需縫合固定，大大提高了手術操作性。因此，我們進一步觀察 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜預防大鼠腹腔粘連的效果，以期拓展其在醫藥領域的應用范圍。
本研究結果顯示，PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜安全性好。大體觀察示，術后 3 d 模型組出現腹腔粘連，而PLGA/PEG組尚未形成粘連，表明 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜能起到良好屏障作用；且PLGA/PEG組動物無死亡，說明 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜不引起機體異物反應，安全性高。研究發現，手術后腹腔粘連一般高發于術后 7～15 d，且粘連程度較為嚴重[23]，而在此高發時期內，PLGA/PEG組大鼠腹腔粘連程度顯著低于模型組，提示 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜可以有效預防腹腔術后粘連的發生。隨植入時間延長，腹腔內的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜明顯縮小，至術后 8 周時幾乎未見膜殘留，提示該膜具有良好生物降解性，克服了傳統生物膜的缺點與不足[19]，植入體內后無需二次手術取出。組織學檢查發現，與模型組比較，使用 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜后，PLGA/PEG組大鼠組織病變減輕，腹腔粘連程度明顯降低，進一步明確了該膜具有預防術后腹腔粘連的作用。
綜上述，本研究為 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜用于臨床預防術后腹腔粘連提供了新思路，但臨床應用前需進一步研究其細胞黏附性和毒性及分子作用機制。
腹腔粘連是腹部外科手術常見難題之一，術后粘連發生率可達 50%～95%[1]，常導致腹痛、腸梗阻、不孕等嚴重并發癥[2-4]。目前，最基本的粘連防治方法是提高手術技巧，但也不能完全避免損傷。此外，臨床也使用藥物或者給予腹腔沖洗、屏障材料以預防粘連發生。其中，預防腹腔粘連效果最佳的手段是使用屏障材料，現已研發出各種聚合物制成的膜狀或片狀屏障材料[5-6]，然而這些材料存在操作時易受損、生物降解性不穩定等缺陷[7-8]，大大限制了其臨床效果。因此尋找穩定性更好、生物相容性良好的防粘連材料對于預防腹腔術后粘連具有重要意義。目前，臨床應用的腹腔防粘連產品多需二次手術取出，而近年可生物降解并自行吸收的復合材料在預防肌腱粘連等方面顯示了良好的應用前景[9-11]，因此研究傾向于使用此類材料制備腹腔防粘連產品。
聚乳酸/乙醇酸共聚物（poly-L-lactic/glycolic acid，PLGA）具有較高的生物相容性，并對生物體無危害[12-13]，但其在力學性能和親水性能方面存在不足。在 PLGA 中添加親水性聚合物聚乙二醇（pol-yethylene glycol，PEG），并利用靜電紡絲技術制備 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜，不但能增加親水性和柔韌性，而且更易貼附創面，不易脫落[14]。本實驗旨在通過建立大鼠腹腔粘連模型，研究 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜對大鼠術后腹腔粘連的預防作用，為 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜用于臨床提供實驗依據。報告如下。
1 材料與方法
1.1 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜的制備
本實驗 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜由廣州市電紡生物科技有限公司制備。將 PLGA 和 PEG 按照 19∶1（M/M）混合后，溶解于有機溶劑中獲得電紡液，通過靜電紡絲技術制備成 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜。靜電紡絲條件：電壓 20 kV，流速 0.6 m/h，接收距離 20 cm，接收速度 150 r/min；于 40℃ 真空干燥 3 h，除去殘留溶劑，并行 25 kGy 輻照滅菌。
大體觀察 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜物理外觀形態，并用數顯千分測厚規（上海川陸量具有限公司）測定膜厚度，掃描電鏡測定膜微觀形貌以及纖維直徑。根據 GBT 16886.19-2011 醫療器械生物學評價第 19 部分標準，選擇柔軟質韌、具有適宜厚度，且掃描電鏡結果顯示具有均一、無串珠纖維形態的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜進行實驗。
1.2 實驗分組及方法
成年 SPF 級 SD 大鼠 54 只，雌雄各半，體質量 180～200 g，購于廣東省醫學實驗動物中心，適應性飼養 1 周后進行實驗。將 54 只大鼠隨機分為 3 組，其中正常對照組 6 只、模型組 24 只、PLGA/PEG 組 24 只。正常對照組大鼠不進行任何處理。模型組及 PLGA/PEG 組制備腹腔粘連模型，制備方法參考文獻[15-16]并加以改進。大鼠術前禁食 24 h，稱重后按 3.5 mL/kg 標準腹腔注射水合氯醛麻醉，腹部剃毛，仰臥位固定于手術板。沿腹中線作縱行切口，逐層剪開皮膚和肌層，暴露臟器，取出盲腸置于無菌紗布上，待漿膜干燥后，用病理切片刀輕刮盲腸表面，直至呈現明顯點狀滲血，滴加 1～2 滴 95% 乙醇加速滲血并立即擦干。模型組直接將盲腸放回腹腔；PLGA/PEG 組將大小為 1.5 cm×1.0 cm 的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜覆蓋創面后，再將盲腸放回腹腔內。最后，在盲腸對應側用醫用組織鉗將腹壁夾傷，并使盲腸與受損腹壁相對。縫合肌層和皮膚，關閉切口。術后肌肉注射青霉素，每天 1 次，連續 2 d；聚維酮碘聯合 75% 乙醇消毒，每天 1 次，連續 3 d。
模型組和 PLGA/PEG 組分別于術后 3 d 及 1、2、8 周各取 6 只大鼠進行觀測，正常對照組于實驗結束時取 6 只大鼠進行觀測。
1.3 觀測指標
1.3.1 一般情況 術后觀察模型組及 PLGA/PEG 組大鼠成活情況，如發生死亡進行及時解剖觀察，并對應補充大鼠。同時觀察大鼠切口愈合、飲食及活動等。
1.3.2 大體觀察 取各時間點大鼠麻醉后，按照原切口入路，肉眼觀察各組盲腸與創傷腹壁間粘連情況，以及各器官和組織的變化。參考 Belluco 法[17]和 Phillips 法[18]，自定腹腔粘連程度評級標準，包括粘連面積以及分離難易程度兩方面。0 級，無粘連；Ⅰ 級，粘連面積≤25%，易于分離；Ⅱ 級，粘連面積 25%～50%，分離容易，可牽引分離；Ⅲ 級，粘連面積 50%～75%，分離較困難，需鈍性分離；Ⅳ 級，粘連面積 75%～100%，分離困難，需銳性分離。肉眼觀察 PLGA/PEG 組各時間點 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜降解情況。
1.3.3 組織學觀察 各時間點大體觀察后，模型組和 PLGA/PEG 組取盲腸手術部位和腹壁組織，正常對照組取對應部位組織，置于 10% 甲醛溶液固定，脫水，包埋，常規石蠟切片，片厚 4 μm，HE 染色，光鏡檢查大鼠腸管結構形態、纖維結締組織增生及炎性細胞浸潤情況。
1.4 統計學方法
采用 SPSS16.0 統計軟件進行分析。等級資料組間比較采用 Kruskal-Wallis H 檢驗；檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜觀察
采用靜電紡絲技術成功制備 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜，呈白色、不透明狀薄膜，質地柔軟，表面光滑。掃描電鏡觀察示，PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜主要由纖維無序交錯堆積而成，使膜具備微孔結構，纖維直徑為 0.8～1.0 μm；膜厚度 0.04～0.06 mm。見圖1。
圖1
PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜觀察
a. 大體觀察；b. 掃描電鏡觀察（×5 000）
Figure1. Observation of PLGA/PEG electrospun polymer membranea. Gross observation; b. Scanning electron microscope observation (×5 000)
2.2 動物實驗觀察
2.2.1 一般情況 模型組及 PLGA/PEG 組大鼠術后均存活至實驗完成，切口愈合良好，飲食正常。
2.2.2 大體觀察 ① PLGA/PEG 膜植入體內后降解情況：PLGA/PEG 組術后 3 d，大鼠腹部、腸體正常，PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜貼附于盲腸創面，呈白色或乳白色狀態，其中 5 只可見膜折疊；術后 1 周，大鼠腹部、腸體均正常，膜仍貼附于盲腸創面上，呈白色，其邊緣有皺褶；術后 2 周，大鼠肝葉邊緣均變鈍，盲腸創面見半透膜貼附，膜較前明顯縮小；術后 8 周，可見膜碎裂降解，僅見膜大致輪廓或降解完全。見圖 2。
圖2
各時間點 PLGA/PEG 組腹腔粘連及 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜大體觀察
箭頭示 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜 a. 術后 3 d；b. 術后 1 周；c. 術后 2 周；d. 術后 8 周
Figure2. Observation of intraperitoneal adhesion and PLGA/PEG electrospun polymer membrane in PLGA/PEG group at each time pointArrow indicated the PLGA/PEG electrospun polymer membrane a. At 3 days after operation; b. At 1 week after operation; c. At 2 weeks after operation; d. At 8 weeks after operation
②腹腔粘連程度觀察：正常對照組：大鼠盲腸與腹壁結構清晰，無粘連，參照自定分級標準均為 0 級。模型組：術后 3 d 可見腹腔粘連發生，隨時間延長，盲腸與腹壁粘連程度逐漸加重，至術后 8 周時粘連難以分離；PLGA/PEG 組粘連程度比模型組輕，盲腸與腹壁易于分離。見圖 2、3。組間比較示，各時間點，模型組腹腔粘連程度均明顯高于正常對照組及 PLGA/PEG 組（P<0.05）；PLGA/PEG 組與正常對照組比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表 1。
圖3
各時間點正常對照組及模型組腹腔粘連程度觀察
a. 正常對照組；b. 模型組術后 3 d；c. 模型組術后 1 周；d. 模型組術后 2 周；e. 模型組術后 8 周
Figure3. Observation of the intraperitoneal adhesion in control group and model group at each time pointa. Control group; b. Model group at 3 days after operation; c. Model group at 1 week after operation; d. Model group at 2 weeks after operation; e. Model group at 8 weeks after operation
表1
各時間點模型組及 PLGA/PEG 組腹腔粘連分級比較
Table1.
Comparison of intraperitoneal adhesion between model group and PLGA/PEG group at each time point
2.2.3 組織學觀察 正常對照組大鼠腸管形態和結構均正常，未見纖維結締組織增生和炎性細胞浸潤等異常情況。模型組：術后 3 d，見纖維蛋白滲出，開始出現纖維性粘連；術后 1、2 周，肌層不明顯，纖維細胞和間皮細胞融合，并最終形成血管樣粘連，盲腸有大量纖維結締組織增生，小血管明顯增多，成纖維細胞活躍增長，黏膜下層伴有嚴重炎性細胞浸潤；術后 8 周，肌層增厚。PLGA/PEG 組：各時間點與模型組相比，盲腸纖維結締組織增生明顯減緩，粘連程度明顯降低，僅見少量炎性細胞浸潤。見表 2～5 及圖 4。
圖4
各組組織學觀察（HE×100）
a. 正常對照組；b. 模型組術后 3 d；c. 模型組術后 1 周；d. 模型組術后 2 周；e. 模型組術后 8 周；f. PLGA/PEG 組術后 3 d；g. PLGA/PEG 組術后 1 周；h. PLGA/PEG 組術后 2 周；i. PLGA/PEG 組術后 8 周
Figure4. Histological observation in each group (HE×100)a. Control group; b. Model group at 3 days after operation; c. Model group at 1 week after operation; d. Model group at 2 weeks after operation; e. Model group at 8 weeks after operation; f. PLGA/PEG group at 3 days after operation; g. PLGA/PEG group at 1 week after operation; h. PLGA/PEG group at 2 weeks after operation; i. PLGA/PEG group at 8 weeks after operation
表2
術后 3 d 模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table2.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 3 days after operation
表3
術后 1 周模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table3.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 1 weeks after operation
表4
術后 2 周模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table4.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 2 weeks after operation
表5
術后 8 周模型組及 PLGA/PEG 組組織學觀察評價結果
Table5.
Results of histological observation in model group and PLGA/PEG group at 8 weeks after operation
3 討論
PLGA 是可生物降解復合高分子材料，它由乳酸和乙醇酸聚合而成，主要用于組織工程血管、多孔微球和緩釋控釋材料等領域研究。PEG 無毒且具有良好水溶性。本研究將 PEG 加入 PLGA 中，利用靜電紡絲技術成功制備 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜。該膜呈白色、不透明狀薄膜，質地柔軟，表面光滑。與傳統濕法紡絲、干法紡絲等工藝制備的膜相比，靜電紡絲技術制備的膜具有纖維直徑小、比表面積大、孔隙率高、長徑比大、力學性能好等優點[19]；有研究表明[20-22]，其微孔結構與細胞外基質類似，可加速細胞增殖，促進組織修復。此外，本研究制備的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜黏附性能良好，能穩定貼附于創口而無需縫合固定，大大提高了手術操作性。因此，我們進一步觀察 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜預防大鼠腹腔粘連的效果，以期拓展其在醫藥領域的應用范圍。
本研究結果顯示，PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜安全性好。大體觀察示，術后 3 d 模型組出現腹腔粘連，而PLGA/PEG組尚未形成粘連，表明 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜能起到良好屏障作用；且PLGA/PEG組動物無死亡，說明 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜不引起機體異物反應，安全性高。研究發現，手術后腹腔粘連一般高發于術后 7～15 d，且粘連程度較為嚴重[23]，而在此高發時期內，PLGA/PEG組大鼠腹腔粘連程度顯著低于模型組，提示 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜可以有效預防腹腔術后粘連的發生。隨植入時間延長，腹腔內的 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜明顯縮小，至術后 8 周時幾乎未見膜殘留，提示該膜具有良好生物降解性，克服了傳統生物膜的缺點與不足[19]，植入體內后無需二次手術取出。組織學檢查發現，與模型組比較，使用 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜后，PLGA/PEG組大鼠組織病變減輕，腹腔粘連程度明顯降低，進一步明確了該膜具有預防術后腹腔粘連的作用。
綜上述，本研究為 PLGA/PEG 可吸收電紡聚合膜用于臨床預防術后腹腔粘連提供了新思路，但臨床應用前需進一步研究其細胞黏附性和毒性及分子作用機制。
