目的探討人源性角質細胞生長因子2（human keratinocyte growth factor 2，hKGF-2）對體外長期培養人胚神經干細胞（human neural stem cells，hNSCs）存活和分化的影響。 方法將液氮凍存17代hNSCs復蘇常規培養7 d形成神經球后，取少許行免疫細胞化學染色鑒定干細胞及分化細胞特異抗原。一部分神經球濃縮后種植至12孔培養板中，分為7組，每組6孔，均添加1 mL基礎培養液[含N2（1∶100）、20 ng/mL EGF的DMEM/F12培養基]后，B、C、D、E、F組分別添加10、30、60、90、120 ng/mL KGF-2，G組添加10 ng/mL bFGF，A組為空白對照組；培養7、14 d觀察并計數神經球與hNSCs，了解神經球生長與增殖情況。另一部分濃縮后種植至置有多聚賴氨酸包被玻片的6孔培養板內，分為4 組，每組6孔，均添加3 mL DMEM/F12培養基后，A1、B1、C1、D1組對應加入N2（1∶100）、N2（1∶100） + 90 ng/ mL hKGF-2、FBS（1∶20）、FBS（1∶20）+ 90 ng/mL hKGF-2；培養14 d內觀察神經球生長與分化情況。7 d時各取5 孔玻片行免疫熒光細胞化學鑒定和流式細胞儀檢測，分析神經球的生長與分化狀況。 結果復蘇后培養形成的神經球含大量巢蛋白陽性細胞，充滿整個神經球；誘導分化后表達分化細胞特異性蛋白神經絲200（neurofilament 200，NF-200）和膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）。各組神經球培養7 d后均有不同程度增大；隨hKGF-2濃度增加，神經球數量和hNSCs數目均依次增多，呈遞增趨勢，E、F、G組顯著高于A、B、C、D組（P lt; 0.05）；B、C、D組間兩兩比較差異亦有統計學意義（P lt; 0.05）；但A、B組間以及E、F、G組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。體外誘導過程中，A1、B1、C1、D1組分化細胞生長旺盛程度呈遞增趨勢，組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；B1組NF-200陽性率顯著高于其余3組（P lt; 0.05），GFAP陽性率顯著低于其余3組（P lt; 0.05）；A1、C1、D1組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。培養14 d后各組生長均達峰值，以星形細胞為主。 結論體外培養17代的hNSCs系純化hNSCs，hKGF-2能促進其增殖和誘導分化為神經元細胞。
引用本文： 陽運康,蔣電明,陽明明. 角質細胞生長因子促進人胚神經干細胞增殖與分化的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2013, 27(10): 1246-1251. doi: 10.7507/1002-1892.20130272 復制