引用本文： 秦朗, 李小紅, 羅珊, 汪燕, 李尚為, 楊業洲. 多囊卵巢綜合征慢性炎性相關因子及趨化因子生長調節致癌基因-α表達的研究. 華西醫學, 2015, 30(5): 890-894. doi: 10.7507/1002-0179.20150255 復制
多囊卵巢綜合征（PCOS）是生育年齡婦女常見的內分泌紊亂性疾病。PCOS有復雜的內分泌異常及臨床表現：高雄激素血癥、胰島素抵抗及高胰島素血癥、促性腺激素水平異常、月經紊亂、無排卵、多毛、肥胖、不孕合并雙側卵巢增大呈多囊改變[1]。但是PCOS的發病機制到目前為止尚未十分明了，一般認為高雄激素血癥、胰島素抵抗及高胰島素血癥可能是PCOS的發病機制[2]。自Kelly等[3]首次報道PCOS 患者可能存在慢性炎癥以來，目前認為慢性炎癥可能介導胰島素抵抗參與PCOS的發生發展。這種慢性炎癥不同于細菌、病毒等引起的急性炎癥，是一種低度慢性亞臨床炎癥[4]。生長調節致癌基因（GRO）-α是屬于ELR-CXC族的趨化因子，GRO-α參與多種炎性疾病的發生、發展和免疫反應[5]。有研究認為腫瘤壞死因子-α（TNF）-α表達過多，與GRO-α的表達上調有關[6]。本研究通過對PCOS顆粒細胞、卵泡液和血清炎性因子TNF-α、白細胞介素（IL）-6、IL-8和趨化因子GRO-α的表達以及與體質量指數（BMI）關系的探索，探討慢性炎癥在PCOS 發病過程中的可能作用機制。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
PCOS組：選擇2014年1月－8月在四川大學華西第二醫院生殖中心行體外受精（IVF）-胚胎移植（ET）的PCOS患者40例，年齡25～35歲，平均（28.1±4.3）歲。PCOS的診斷以2003年10月美國生殖醫學學會于荷蘭鹿特丹會議上修訂的PCOS診斷標準[7]為依據：排卵減少或無排卵；臨床或生物化學高雄激素表現；陰道超聲每側卵巢內直徑2～9 mm 的卵泡≥12個或卵巢體積10 cm以上；具有以上3項中2項或以上，并排除了先天性腎上腺皮質增生、雄激素分泌腫瘤及庫欣病等疾病。
對照組：選擇2014年1月－8月在四川大學華西第二醫院生殖中心行IVF-ET的不孕患者40例，年齡23～35歲，平均（27.8±4.5）歲，有原發或繼發不孕2年以上，月經周期正常，內分泌測定正常；B型超聲監測未提示卵巢多囊、子宮肌瘤及子宮內膜異位癥等異常聲像改變；不孕原因由男性因素或輸卵管因素構成。
PCOS組和對照組均已簽署知情同意書。因GRO-α在鼻息肉中有顯著表達，因此GRO-α陽性標準對照標準選自鼻息肉患者[8-9]。
1.2 超促排卵治療
PCOS組和對照組均采用IVF長方案，在上一個黃體中期用短效促性腺激素釋放激素激動劑（GnRH-a），月經周期第3天用促性腺激素，月經周期第8天開始陰道B型超聲檢測卵泡的數目、卵泡的直徑及子宮內膜的發育情況，當1個卵泡直徑≥18 mm，2個或2個以上的卵泡直徑≥16 mm時，注射人絨毛膜促性腺激素（hCG）10 000 U后34～36 h取卵。
1.3 標本采集和檢測
1.3.1 顆粒細胞的收集和檢測
① 顆粒細胞的收集。取卵時收集無血污染卵泡沖洗液，所有穿刺液經2 000 r/min離心10 min，去上清液；細胞沉淀物用磷酸鹽緩沖液（PBS）配成懸液，以1︰1的比例將細胞懸液緩慢加入到淋巴細胞分離液上；以2 000 r/min 離心30 min，吸取顆粒細胞層，含有少量紅細胞，用紅細胞裂解液洗滌、溶解紅細胞；最后經PBS洗滌去除紅細胞裂解液。將用于實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）的顆粒細胞置于1 mL TRIzol（美國Gibco公司）和5 g大腸埃希菌轉錄RNA（美國Gibco公司），標本置入-80℃冰柜直至抽提RNA，從樣本提取到完成的整個時間為1.0～1.5 h。
② RNA的抽提。用直接從細胞和組織提取總RNA的TRIzol法抽提顆粒細胞RNA，RNA在10～15 μL的焦碳酸二乙酯水溶液中，5 μL的RNA以DNA酶（美國Gibco公司）在10 μL的反應體系中處理15 min，然后用100 U的SuperscripⅡ（美國Gibco公司），在21.5 μL的反應體系中42℃反轉錄50 min，加入核糖核酸酶H（1.5 U，美國Gibco公司），樣本在37℃孵化20 min，直至酶滅活，在聚合酶鏈式反應（PCR）前逆轉錄反應以1︰10水稀釋。
③ RT-PCR技術。PCR反應體系由10×PCR緩沖液10 μL，4×脫氧核糖核苷三磷酸（各200 μmol/L）215 μL，各引物10 pmoL，模板DNA 2 μg，Taq DNA聚合酶2.5 U，氯化鎂溶液1.5 mmol/L加雙或三蒸水至100 μL組成。反應條件：預變性94℃，5 min；熱循環94℃，30 s；58℃，30 s；72℃，30 s （共38個循環）；終末延伸72℃，10 min。PCR-CR擴增產物以2%瓊脂糖凝膠（含溴化乙啶0.5 μg/mL）、100 V電壓電泳，30～50 min在紫外線投射儀上觀察，并與PCR標準相對分子質量比較。
④ 引物設計。RT-PCR反應所用引物均由上海晶美生物工程公司合成，聚丙烯酰胺凝膠電泳級純度，引物及預期產物大小見表 1。
⑤ 鼻息肉標本的采集。選取手術后病理診斷為鼻息肉的標本作為陽性對照，組織勻漿后，進行RT-PCR測定，方法同上。
表1
PCOS 相關炎性因子mRNA 的上下游引物及預期產物長度
1.3.2 卵泡液與血清的收集和檢測
① 卵泡液的收集。控制性超促排卵周期取卵時收集留取無血污染的優勢卵泡（直徑≥1.8 cm）的卵泡液，-80℃待測。
② 血清標本的收集。注射hCG當天均空腹采集肘靜脈血，室溫靜置，分離血清，-80℃待測。
③ 檢測項目及檢測方法。酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清和卵泡液的細胞因子，包括TNF-α、IL-6、IL-8和GRO-α，試劑盒分別購自美國Bender公司和美國R&D Systems公司。
1.4 分層因素
BMI=體質量（kg）/身高2（m2）。由于世界衛生組織的標準中BMI的正常范圍為18.5～24.9 kg/m2，因此設定BMI＞25 kg/m2為肥胖，BMI≤25 kg/m2為非肥胖。本研究按是否肥胖分層，對兩組進行比較。
1.5 統計學方法
采用SPSS 12.0分析軟件進行統計學處理。計量資料采用均數±標準差表示，行獨立樣本t檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 RT-PCR檢測卵巢顆粒細胞各細胞因子mRNA的表達
PCOS組與對照組TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢顆粒細胞中均有豐富的表達。PCOS組TNF-α mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢顆粒細胞中的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS組患者IL-6 mRNA在卵巢顆粒細胞中的表達高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS組與對照組卵巢顆粒細胞中IL-6 mRNA表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 2、圖 1。
圖1
肥胖者卵泡顆粒細胞中GRO-α mRNA表達的RT-PCR電泳圖
M：
表2
按是否肥胖分層兩組患者顆粒細胞中細胞因子mRNA表達的比較（n=20，2.2 ELISA法檢測取卵日卵泡液中細胞因子表達
在取卵日卵泡液中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS組的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS組患者IL-6在卵泡液中的表達高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS組與對照組卵泡液中IL-6表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 3。
表3
按是否肥胖分層兩組患者取卵日卵泡液中細胞因子表達的比較（n=20，2.3 ELISA法檢測取卵日血清中細胞因子表達
在取卵日血清中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS組的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS組患者IL-6在血清中的表達高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS組與對照組血清中IL-6表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 4。
表4
按是否肥胖分層兩組患者取卵日血清中細胞因子表達的比較（n=20，3 討論
PCOS嚴重影響婦女身心健康，不僅會導致不孕不育和月經不調，也可致糖尿病、心血管疾病以及子宮內膜癌等疾病發生率上升[10]。2001年Kelly等[3]首次報道PCOS患者體內存在慢性低度炎癥狀態以來，近年來的研究發現慢性炎癥參與PCOS的發生與發展[11]。慢性低度性炎癥是由營養物代謝過剩觸發的炎癥反應，又稱為代謝性炎癥，其分子及信號通道與傳統（低度）的炎癥反應相似，可以導致一些慢性代謝性疾病，特別是2型糖尿病、心血管疾病及肥胖的發生[12]。這種亞臨床炎癥屬于自身免疫性炎癥和感染性水平以下的炎癥，無紅腫熱痛等局部和全身癥狀，主要表現為急性相反應產物，IL-6、如C反應蛋白、血漿纖溶酶原激活物抑制物1、單核細胞趨化因子1、TNF-α和IL-18等的增加[13-15]。有研究發現PCOS患者亞臨床慢性炎癥因子水平升高，并與胰島素抵抗存在密切關系，慢性炎癥通過各種途徑介導胰島素抵抗，并導致高雄激素血癥，進一步誘導了PCOS的發生和發展[16]。
GRO生長調節致癌基因家族是一類屬于CXC族的趨化因子，包括GRO-α、GRO-β、GRO-γ，系統命名為CXCL1、CXCL2、CXCL3。1987年分離并測序了GRO cDNA，并推測其表達與細胞生長相關，類似于c-fos原癌基因，因此而得名為GRO。此后發現，單核細胞的黏附可導致許多炎癥介質基因的表達，其中有1個克隆與原先報道的GRO相似，被命名為GRO-α，GRO與其他CXC族趨化因子如IL-8、中性粒細胞激活蛋白2、上皮中性粒細胞激活肽78、人血小板因子4具有較高同源性[17]。GRO-αmRNA表達增加，局部會出現白細胞浸潤其中，出現轉錄調控NF-κB的紊亂，最終導致了細胞趨化因子在體內的表達異常。有研究發現GRO-α在傷口滲出液和燒傷水皰中有大量的表達，而且TNF-α的表達增加，后者與GRO-α的表達有關[18]。由此推測TNF-α介導PCOS胰島素抵抗也是通過此途徑[19]。本研究發現在PCOS的卵巢顆粒細胞中有GRO-α的大量表達，并且發現在PCOS患者卵巢顆粒細胞卵泡液和血清中GRO-α和IL-8、TNF-α的表達水平升高。推測可能是GRO-α與IL-8上調了TNF-α，導致了炎性反應的發生，最終導致了胰島素抵抗。
PCOS患者血清IL-6水平是否增高存在爭議。IL-6是一種多效能的細胞因子，它主要由免疫細胞分泌，脂肪細胞、肌肉細胞也可分泌，不僅參與造血、骨代謝和能量代謝，亦涉及機體炎癥反應[20]。Amato等[21]對31例PCOS不孕患者和自身卵巢功能正常因男性不育而體外授精的39例婦女進行對照研究發現，前者血清中的TNF-α和IL-6濃度均較后者顯著增高，提示細胞因子參與了PCOS的發病機制。但也有研究認為PCOS患者IL-6水平并不升高[22]。而本研究發現肥胖者中PCOS婦女卵巢顆粒細胞、血清和卵泡液IL-6水平明顯高于對照組，而非肥胖者中兩組差異均無統計學意義（P＞0.05），提示BMI是一個關鍵點，其可能與細胞因子的表達有密切的關系。目前的研究已證實循環中高水平IL-6是發生2型糖尿病和胰島素抵抗綜合征的獨立風險因子[23]。IL-6受血糖調節，高血糖可促進胰島細胞分泌IL-6，而IL-6又可促進B淋巴細胞分化和T淋巴細胞的激活，引起胰島細胞功能受損，從而誘發胰島素抵抗。同時高血糖刺激氧化作用和脂類過氧化物作用參與上調炎癥基因的表達，誘導細胞炎癥因子的產生，進而參與胰島素抵抗。
綜上所述，GRO-α、IL-8、TNF-α、IL-6都與PCOS的發病有關，只是作用環節不同。GRO-α、IL-8是炎癥反應的重要標志物，與TNF-α、IL-6相關，調控著TNF-α的表達，起著介導炎癥反應的作用，從而導致胰島素抵抗誘導PCOS的發生和發展[24-25]。本研究是對炎性免疫因素在PCOS發病中作用的初步探索，這為今后深入研究PCOS的病因及對PCOS進行生物治療打下基礎，為今后輔助糾正胰島素抵抗和高雄狀態的治療的抗炎免疫治療提供依據。
多囊卵巢綜合征（PCOS）是生育年齡婦女常見的內分泌紊亂性疾病。PCOS有復雜的內分泌異常及臨床表現：高雄激素血癥、胰島素抵抗及高胰島素血癥、促性腺激素水平異常、月經紊亂、無排卵、多毛、肥胖、不孕合并雙側卵巢增大呈多囊改變[1]。但是PCOS的發病機制到目前為止尚未十分明了，一般認為高雄激素血癥、胰島素抵抗及高胰島素血癥可能是PCOS的發病機制[2]。自Kelly等[3]首次報道PCOS 患者可能存在慢性炎癥以來，目前認為慢性炎癥可能介導胰島素抵抗參與PCOS的發生發展。這種慢性炎癥不同于細菌、病毒等引起的急性炎癥，是一種低度慢性亞臨床炎癥[4]。生長調節致癌基因（GRO）-α是屬于ELR-CXC族的趨化因子，GRO-α參與多種炎性疾病的發生、發展和免疫反應[5]。有研究認為腫瘤壞死因子-α（TNF）-α表達過多，與GRO-α的表達上調有關[6]。本研究通過對PCOS顆粒細胞、卵泡液和血清炎性因子TNF-α、白細胞介素（IL）-6、IL-8和趨化因子GRO-α的表達以及與體質量指數（BMI）關系的探索，探討慢性炎癥在PCOS 發病過程中的可能作用機制。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
PCOS組：選擇2014年1月－8月在四川大學華西第二醫院生殖中心行體外受精（IVF）-胚胎移植（ET）的PCOS患者40例，年齡25～35歲，平均（28.1±4.3）歲。PCOS的診斷以2003年10月美國生殖醫學學會于荷蘭鹿特丹會議上修訂的PCOS診斷標準[7]為依據：排卵減少或無排卵；臨床或生物化學高雄激素表現；陰道超聲每側卵巢內直徑2～9 mm 的卵泡≥12個或卵巢體積10 cm以上；具有以上3項中2項或以上，并排除了先天性腎上腺皮質增生、雄激素分泌腫瘤及庫欣病等疾病。
對照組：選擇2014年1月－8月在四川大學華西第二醫院生殖中心行IVF-ET的不孕患者40例，年齡23～35歲，平均（27.8±4.5）歲，有原發或繼發不孕2年以上，月經周期正常，內分泌測定正常；B型超聲監測未提示卵巢多囊、子宮肌瘤及子宮內膜異位癥等異常聲像改變；不孕原因由男性因素或輸卵管因素構成。
PCOS組和對照組均已簽署知情同意書。因GRO-α在鼻息肉中有顯著表達，因此GRO-α陽性標準對照標準選自鼻息肉患者[8-9]。
1.2 超促排卵治療
PCOS組和對照組均采用IVF長方案，在上一個黃體中期用短效促性腺激素釋放激素激動劑（GnRH-a），月經周期第3天用促性腺激素，月經周期第8天開始陰道B型超聲檢測卵泡的數目、卵泡的直徑及子宮內膜的發育情況，當1個卵泡直徑≥18 mm，2個或2個以上的卵泡直徑≥16 mm時，注射人絨毛膜促性腺激素（hCG）10 000 U后34～36 h取卵。
1.3 標本采集和檢測
1.3.1 顆粒細胞的收集和檢測
① 顆粒細胞的收集。取卵時收集無血污染卵泡沖洗液，所有穿刺液經2 000 r/min離心10 min，去上清液；細胞沉淀物用磷酸鹽緩沖液（PBS）配成懸液，以1︰1的比例將細胞懸液緩慢加入到淋巴細胞分離液上；以2 000 r/min 離心30 min，吸取顆粒細胞層，含有少量紅細胞，用紅細胞裂解液洗滌、溶解紅細胞；最后經PBS洗滌去除紅細胞裂解液。將用于實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）的顆粒細胞置于1 mL TRIzol（美國Gibco公司）和5 g大腸埃希菌轉錄RNA（美國Gibco公司），標本置入-80℃冰柜直至抽提RNA，從樣本提取到完成的整個時間為1.0～1.5 h。
② RNA的抽提。用直接從細胞和組織提取總RNA的TRIzol法抽提顆粒細胞RNA，RNA在10～15 μL的焦碳酸二乙酯水溶液中，5 μL的RNA以DNA酶（美國Gibco公司）在10 μL的反應體系中處理15 min，然后用100 U的SuperscripⅡ（美國Gibco公司），在21.5 μL的反應體系中42℃反轉錄50 min，加入核糖核酸酶H（1.5 U，美國Gibco公司），樣本在37℃孵化20 min，直至酶滅活，在聚合酶鏈式反應（PCR）前逆轉錄反應以1︰10水稀釋。
③ RT-PCR技術。PCR反應體系由10×PCR緩沖液10 μL，4×脫氧核糖核苷三磷酸（各200 μmol/L）215 μL，各引物10 pmoL，模板DNA 2 μg，Taq DNA聚合酶2.5 U，氯化鎂溶液1.5 mmol/L加雙或三蒸水至100 μL組成。反應條件：預變性94℃，5 min；熱循環94℃，30 s；58℃，30 s；72℃，30 s （共38個循環）；終末延伸72℃，10 min。PCR-CR擴增產物以2%瓊脂糖凝膠（含溴化乙啶0.5 μg/mL）、100 V電壓電泳，30～50 min在紫外線投射儀上觀察，并與PCR標準相對分子質量比較。
④ 引物設計。RT-PCR反應所用引物均由上海晶美生物工程公司合成，聚丙烯酰胺凝膠電泳級純度，引物及預期產物大小見表 1。
⑤ 鼻息肉標本的采集。選取手術后病理診斷為鼻息肉的標本作為陽性對照，組織勻漿后，進行RT-PCR測定，方法同上。
表1
PCOS 相關炎性因子mRNA 的上下游引物及預期產物長度
1.3.2 卵泡液與血清的收集和檢測
① 卵泡液的收集。控制性超促排卵周期取卵時收集留取無血污染的優勢卵泡（直徑≥1.8 cm）的卵泡液，-80℃待測。
② 血清標本的收集。注射hCG當天均空腹采集肘靜脈血，室溫靜置，分離血清，-80℃待測。
③ 檢測項目及檢測方法。酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清和卵泡液的細胞因子，包括TNF-α、IL-6、IL-8和GRO-α，試劑盒分別購自美國Bender公司和美國R&D Systems公司。
1.4 分層因素
BMI=體質量（kg）/身高2（m2）。由于世界衛生組織的標準中BMI的正常范圍為18.5～24.9 kg/m2，因此設定BMI＞25 kg/m2為肥胖，BMI≤25 kg/m2為非肥胖。本研究按是否肥胖分層，對兩組進行比較。
1.5 統計學方法
采用SPSS 12.0分析軟件進行統計學處理。計量資料采用均數±標準差表示，行獨立樣本t檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 RT-PCR檢測卵巢顆粒細胞各細胞因子mRNA的表達
PCOS組與對照組TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢顆粒細胞中均有豐富的表達。PCOS組TNF-α mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢顆粒細胞中的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS組患者IL-6 mRNA在卵巢顆粒細胞中的表達高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS組與對照組卵巢顆粒細胞中IL-6 mRNA表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 2、圖 1。
圖1
肥胖者卵泡顆粒細胞中GRO-α mRNA表達的RT-PCR電泳圖
M：
表2
按是否肥胖分層兩組患者顆粒細胞中細胞因子mRNA表達的比較（n=20，2.2 ELISA法檢測取卵日卵泡液中細胞因子表達
在取卵日卵泡液中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS組的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS組患者IL-6在卵泡液中的表達高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS組與對照組卵泡液中IL-6表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 3。
表3
按是否肥胖分層兩組患者取卵日卵泡液中細胞因子表達的比較（n=20，2.3 ELISA法檢測取卵日血清中細胞因子表達
在取卵日血清中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS組的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS組患者IL-6在血清中的表達高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS組與對照組血清中IL-6表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 4。
表4
按是否肥胖分層兩組患者取卵日血清中細胞因子表達的比較（n=20，3 討論
PCOS嚴重影響婦女身心健康，不僅會導致不孕不育和月經不調，也可致糖尿病、心血管疾病以及子宮內膜癌等疾病發生率上升[10]。2001年Kelly等[3]首次報道PCOS患者體內存在慢性低度炎癥狀態以來，近年來的研究發現慢性炎癥參與PCOS的發生與發展[11]。慢性低度性炎癥是由營養物代謝過剩觸發的炎癥反應，又稱為代謝性炎癥，其分子及信號通道與傳統（低度）的炎癥反應相似，可以導致一些慢性代謝性疾病，特別是2型糖尿病、心血管疾病及肥胖的發生[12]。這種亞臨床炎癥屬于自身免疫性炎癥和感染性水平以下的炎癥，無紅腫熱痛等局部和全身癥狀，主要表現為急性相反應產物，IL-6、如C反應蛋白、血漿纖溶酶原激活物抑制物1、單核細胞趨化因子1、TNF-α和IL-18等的增加[13-15]。有研究發現PCOS患者亞臨床慢性炎癥因子水平升高，并與胰島素抵抗存在密切關系，慢性炎癥通過各種途徑介導胰島素抵抗，并導致高雄激素血癥，進一步誘導了PCOS的發生和發展[16]。
GRO生長調節致癌基因家族是一類屬于CXC族的趨化因子，包括GRO-α、GRO-β、GRO-γ，系統命名為CXCL1、CXCL2、CXCL3。1987年分離并測序了GRO cDNA，并推測其表達與細胞生長相關，類似于c-fos原癌基因，因此而得名為GRO。此后發現，單核細胞的黏附可導致許多炎癥介質基因的表達，其中有1個克隆與原先報道的GRO相似，被命名為GRO-α，GRO與其他CXC族趨化因子如IL-8、中性粒細胞激活蛋白2、上皮中性粒細胞激活肽78、人血小板因子4具有較高同源性[17]。GRO-αmRNA表達增加，局部會出現白細胞浸潤其中，出現轉錄調控NF-κB的紊亂，最終導致了細胞趨化因子在體內的表達異常。有研究發現GRO-α在傷口滲出液和燒傷水皰中有大量的表達，而且TNF-α的表達增加，后者與GRO-α的表達有關[18]。由此推測TNF-α介導PCOS胰島素抵抗也是通過此途徑[19]。本研究發現在PCOS的卵巢顆粒細胞中有GRO-α的大量表達，并且發現在PCOS患者卵巢顆粒細胞卵泡液和血清中GRO-α和IL-8、TNF-α的表達水平升高。推測可能是GRO-α與IL-8上調了TNF-α，導致了炎性反應的發生，最終導致了胰島素抵抗。
PCOS患者血清IL-6水平是否增高存在爭議。IL-6是一種多效能的細胞因子，它主要由免疫細胞分泌，脂肪細胞、肌肉細胞也可分泌，不僅參與造血、骨代謝和能量代謝，亦涉及機體炎癥反應[20]。Amato等[21]對31例PCOS不孕患者和自身卵巢功能正常因男性不育而體外授精的39例婦女進行對照研究發現，前者血清中的TNF-α和IL-6濃度均較后者顯著增高，提示細胞因子參與了PCOS的發病機制。但也有研究認為PCOS患者IL-6水平并不升高[22]。而本研究發現肥胖者中PCOS婦女卵巢顆粒細胞、血清和卵泡液IL-6水平明顯高于對照組，而非肥胖者中兩組差異均無統計學意義（P＞0.05），提示BMI是一個關鍵點，其可能與細胞因子的表達有密切的關系。目前的研究已證實循環中高水平IL-6是發生2型糖尿病和胰島素抵抗綜合征的獨立風險因子[23]。IL-6受血糖調節，高血糖可促進胰島細胞分泌IL-6，而IL-6又可促進B淋巴細胞分化和T淋巴細胞的激活，引起胰島細胞功能受損，從而誘發胰島素抵抗。同時高血糖刺激氧化作用和脂類過氧化物作用參與上調炎癥基因的表達，誘導細胞炎癥因子的產生，進而參與胰島素抵抗。
綜上所述，GRO-α、IL-8、TNF-α、IL-6都與PCOS的發病有關，只是作用環節不同。GRO-α、IL-8是炎癥反應的重要標志物，與TNF-α、IL-6相關，調控著TNF-α的表達，起著介導炎癥反應的作用，從而導致胰島素抵抗誘導PCOS的發生和發展[24-25]。本研究是對炎性免疫因素在PCOS發病中作用的初步探索，這為今后深入研究PCOS的病因及對PCOS進行生物治療打下基礎，為今后輔助糾正胰島素抵抗和高雄狀態的治療的抗炎免疫治療提供依據。
