小鼠甲狀腺轉錄因子-2轉基因動物表達載體的構建及其在骨髓間充質干細胞中的表達_《華西醫學》

作者：

黃磊 ¹ ,  石冰 ^2,3 , 鄭謙 ^2,3 , 蒙田 ^2,3 , 王龑 ^2,3

1廣州市第一人民醫院口腔科（廣州，510016）;2四川大學口腔疾病研究國家重點實驗室;3四川大學華西口腔醫院唇腭裂外科;

關鍵詞：

甲狀腺轉錄因子-2 表達載體骨髓間質干細胞轉染基因小鼠

DOI：

10.7507/1002-0179.20130522

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目的　構建小鼠甲狀腺轉錄因子-2（TTF-2）轉基因動物表達載體（pBROAD3-TTF-2），觀察其在小鼠骨髓間充質干細胞（BMSC）中的表達。方法　從C57BL/6J小鼠肝臟組織中提取基因組DNA，利用聚合酶鏈式反應方法擴增出TTF-2基因1 113 bp開放閱讀框，通過DNA重組技術將TTF-2基因片段插入克隆載體pMD18-T中，經測序正確后，再重組于pBROAD3-mcs中，構建轉基因動物表達載體pBROAD3-TTF-2，用酶切電泳分析對其進行鑒定。運用脂質體轉染試劑將其轉染BMSC后，蛋白質印跡法檢測TTF-2基因的表達。結果　① DNA測序證實目的基因序列正確無突變，酶切電泳分析得到相應的目的片段，大小與理論計算值一致，成功構建轉基因動物表達載體pBROAD3-TTF-2。② 蛋白質印跡法顯示轉染的BMSC高表達TTF-2蛋白。結論　成功構建了pBROAD3- TTF-2轉基因動物表達載體，顯示其轉染BMSC后TTF-2基因的表達，為下一步建立TTF-2轉基因小鼠模型奠定了基礎。

引用本文： 黃磊,石冰,鄭謙,蒙田,王龑. 小鼠甲狀腺轉錄因子-2轉基因動物表達載體的構建及其在骨髓間充質干細胞中的表達. 華西醫學, 2013, 28(11): 1647-1650. doi: 10.7507/1002-0179.20130522 復制

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12.	J薩姆布魯克,拉塞爾DW. 分子克隆實驗指南[M]. 3版. 黃培堂, 等, 譯. 北京: 科學出版社, 2002: 331-332.

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